[发明专利]一种PD1基因过表达稳转株及其构建方法在审
| 申请号： | 201910678540.8 | 申请日： | 2019-07-25 |
| 公开（公告）号： | CN110438085A | 公开（公告）日： | 2019-11-12 |
| 发明（设计）人： | 陈国忠 | 申请（专利权）人： | 福建谷科生物科技有限公司 |
| 主分类号： | C12N5/10 | 分类号： | C12N5/10;C12N15/85;C12N15/66 |
| 代理公司： | 北京联瑞联丰知识产权代理事务所(普通合伙) 11411 | 代理人： | 郭堃 |
| 地址： | 351100 福建省莆田市湄洲湾北*** | 国省代码： | 福建;35 |
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| 摘要： | 本发明提供一种PD1基因过表达稳转株及其构建方法，本发明属于PD1基因构建技术领域，包括下列步骤：步骤1:细胞培养；步骤2:PRKACB基因的PCR扩增；步骤3:pEGFP‑C1‑PRKACB真核载体的构建和鉴定；步骤4:重组载体pEGFP‑C1‑PRKACB PCR和酶切鉴定；步骤5:新霉素筛选稳定转染pEGFP‑C1‑PRKACB细胞株。本发明，通过RT‑PCR和Westem blot证实pECFP‑CI一PRKACB瞬时转染LTEP‑a‑2后上调PRKACB基因mR.NA和蛋白水平的表达升高；根据Westernblot结果筛选出PRKACB蛋白上调最显著的稳定转染细胞株。 | ||
| 搜索关键词： | 构建 基因过表达 细胞培养 转染细胞株 蛋白水平 基因构建 结果筛选 酶切鉴定 瞬时转染 真核载体 重组载体 基因 细胞株 新霉素 转染 蛋白 升高 筛选 | ||
【主权项】：
1.一种PD1基因过表达稳转株及其构建方法，其特征在于：所述PD1基因过表达稳转株及其构建方法包括下列步骤：步骤1:细胞培养；步骤2:PRKACB基因的PCR扩增；步骤3:pEGFP‑C1‑PRKACB真核载体的构建和鉴定；步骤4:重组载体pEGFP‑C1‑PRKACB PCR和酶切鉴定；步骤5:新霉素筛选稳定转染pEGFP‑C1‑PRKACB细胞株。
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