[发明专利]基于运动发酵单胞菌内源CRISPR-Cas系统的多基因位点同时编辑方法及其应用有效
| 申请号： | 201910692118.8 | 申请日： | 2019-07-30 |
| 公开（公告）号： | CN110331158B | 公开（公告）日： | 2021-09-14 |
| 发明（设计）人： | 彭文舫;杨世辉;郑艳丽;易犁;马立新 | 申请（专利权）人： | 湖北大学 |
| 主分类号： | C12N15/74 | 分类号： | C12N15/74;C12N1/21;C12R1/01 |
| 代理公司： | 北京金智普华知识产权代理有限公司 11401 | 代理人： | 杨采良 |
| 地址： | 430062 湖北*** | 国省代码： | 湖北;42 |
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| 摘要： | 本发明属于基因工程技术领域，尤其涉及基于运动发酵单胞菌内源CRISPR‑Cas系统的多基因位点同时编辑方法及其应用。该方法主要包括以下步骤：构建含人工CRISPR表达单元的质粒；选取若干个目标编辑靶位点，设计gRNA序列；将若干个gRNA序列串联，构建至含人工CRISPR表达单元的质粒上；将供体DNA序列构建至载体上，获得编辑质粒；将编辑质粒转化至感受态细胞中进行编辑。本发明利用运动发酵单胞菌内源CRISPR‑Cas系统构建基因编辑平台，打破外源CRISPR‑Cas9基因组编辑在该类菌株中效率低下的限制，在该菌株中实现多基因的同时快速、高效敲除，促进代谢工程、系统生物学及合成生物学的发展。 | ||
| 搜索关键词： | 基于 运动 发酵 单胞菌 内源 crispr cas 系统 多基因 同时 编辑 方法 及其 应用 | ||
【主权项】：
1.基于运动发酵单胞菌內源CRISPR‑Cas系统的多基因位点同时编辑方法，其特征在于，包括以下步骤：步骤1：构建含人工CRISPR表达单元的质粒；步骤2：选取若干个目标编辑靶位点，针对目标编辑靶位点设计gRNA序列；步骤3：将若干个所述gRNA序列串联，并构建至含人工CRISPR表达单元的质粒上，构建载体；步骤4：将供体DNA序列构建至载体上，获得编辑质粒；步骤5：将编辑质粒转化至感受态细胞中进行编辑。
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