[发明专利]一种酶突变体

摘要

本发明公开了一种酶突变体，属于基因工程技术领域。此方法基于以SAPs为基础构建的功能性多肽文库，整个获得酶突变体的过程快速、高效、便捷；同时，本发明得到的酶突变体，相较于野生型碱性果胶酶，碱性果胶酶的融合酶突变体的胞外酶活最高提高了15.32倍，稳定性最高提高了3.86倍，比酶活最高提高了2.55倍；脂肪氧合酶融合酶突变体胞内酶活最高提高了2.49倍，稳定性最高提高了3.13倍，比酶活最高提高了0.9倍；天冬酰胺酶融合酶突变体胞外酶活最高提高了2.25倍，稳定性最高提高了3.56倍，比酶活最高提高了1.34倍。

主权项

1.一种得到高表达、高活力及高稳定性的酶突变体的方法，其特征在于，包含如下步骤：步骤1：构建功能性多肽文库；步骤2：将步骤1中功能性多肽文库所得的表达宿主细胞以荧光强度为筛选标准，进行初筛，筛选出强荧光强度的宿主细胞；步骤3：将步骤2中初筛后获得的强荧光强度的宿主细胞进行培养，以荧光强度为筛选标准，进行复筛鉴定，再次筛选出具有强荧光强度的宿主细胞；步骤4：将步骤3中复筛所得的具有强荧光强度的宿主细胞中的表达载体进行荧光蛋白表达基因缺失，将缺失后的表达载体重新进行异源表达，获得酶突变体；步骤5：将获得的酶突变体经过热处理后进行稳定性测定，筛选出具有高稳定性的酶突变体；所述步骤1中的功能性多肽文库包含宿主细胞；所述宿主细胞含有功能性表达载体；所述功能性表达载体包含不同长度及氨基酸组成的双亲短肽(self‑assembling amphipathic peptide，SAP)、不同长度及不同刚柔性的连接肽(linker)、荧光蛋白表达基因以及待筛选酶表达基因；所述酶为碱性果胶酶；所述碱性果胶酶的氨基酸序列如SEQ ID NO.6所示。