[发明专利]一种AEP环化酶在大肠杆菌中的融合表达方法、AEP环化酶环化能力鉴定方法及其应用有效
| 申请号： | 201910712666.2 | 申请日： | 2019-08-02 |
| 公开（公告）号： | CN110331157B | 公开（公告）日： | 2021-06-08 |
| 发明（设计）人： | 彭文舫;胡晓韵;易犁;范贤;马立新 | 申请（专利权）人： | 湖北大学 |
| 主分类号： | C12N15/70 | 分类号： | C12N15/70;C12N9/50;C12Q1/37 |
| 代理公司： | 北京金智普华知识产权代理有限公司 11401 | 代理人： | 杨采良 |
| 地址： | 430062 湖北*** | 国省代码： | 湖北;42 |
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| 摘要： | 本发明属于基因工程技术领域，尤其涉及一种AEP环化酶在大肠杆菌中的融合表达方法、AEP环化酶环化能力鉴定方法及其应用。本发明通过在大肠杆菌中利用不同的融合标签进行融合表达，之后通过移除融合标签得到表达量较高的AEP环化酶，其表达量为0.36±0.05mg/mL，高于原先文献报道的1.8mg/L。本发明采用一种新的方式验证AEP环化酶的环化能力，通过构建一种串联底物，选取能够较好的在SDS‑PAGE中观察到并且具备环化的可能性的蛋白为底物，并构建包含TEV蛋白酶的底物序列的串联底物，根据蛋白酶切割后底物大小的变化或者条带数量来鉴定是否环化，操作简单、方便，实用性强。 | ||
| 搜索关键词： | 一种 aep 环化酶 大肠杆菌 中的 融合 表达 方法 环化 能力 鉴定 及其 应用 | ||
【主权项】：
1.一种AEP环化酶在大肠杆菌中的融合表达方法，其特征在于，包括以下步骤：S1：将含有蛋白酶多肽底物识别序列的AEP序列与融合标签连接，构建重组DNA序列；S2：将重组DNA序列插入表达载体，构建重组质粒；S3：重组质粒的转化及目标蛋白表达；S4：分离融合标签和AEP环化酶。
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