[发明专利]一种金果榄雌株脱毒苗培养方法

摘要

本发明公开了一种金果榄雌株脱毒苗培养方法，包括以下步骤：包括以下步骤：金果榄雌株的选择、金果榄雌株茎尖表面消毒、金果榄雌株茎尖剥离、病毒检测与脱毒株系建立、金果榄雌株脱毒苗的快速繁殖、金果榄雌株脱毒苗驯化培养。本发明选择金果榄雌株作为采集对象，驯化获得的均是脱毒金果榄雌株，种植后都会开花结果；采用的是植株茎尖生长点分生组织，该部位细胞含病毒较少或不含病毒，并经过病毒检测合格，所生产的苗株是不含病毒的，可恢复植物原有性状，显著提高金果榄的块茎品质、产量，降低病虫害带来的种植风险；本发明利用植物细胞的全能性，通过本发明的扩繁培养方法建立了一个完整的无菌繁殖系统，大大提高育苗产量和品质。

主权项

1.一种金果榄雌株脱毒苗培养方法，其特征在于包括以下步骤：1）金果榄雌株的选择：金果榄雌株选择野生状态下，采集前2‑3年开花结果正常，植株健壮，无病虫害的金果榄雌株作为材料采集对象；采集时间选择在每年3‑6月，植株开花前，挑选主茎或侧茎生长旺盛的茎尖作为外植体；2）金果榄雌株茎尖表面消毒：采集来的茎尖剪取茎尖1‑1.5厘米，自来水添加洗洁精清洗表面附着脏物，用自来水流水冲洗10分钟，用0.3%新洁尔灭溶液浸泡表面杀菌20分钟，纯净水流水冲洗2小时，移入事先准备好的超净工作台备用；在超净工作台内先用75%酒精浸泡外植体30秒，无菌水冲洗2次，然后置于0.1%氯化汞溶液中浸泡15‑20分钟，用无菌水冲洗3‑5次取出放置在无菌滤纸上吸干表面水分备用；3）金果榄雌株茎尖剥离：在已灭好菌的超净工作台内、在解剖显微镜下剥取金果榄茎尖带1‑2个叶原基的约0.15‑0.2mm生长点，将剥离下茎尖接种于快速生长1号培养基上培养45天获得完整金果榄雌株；4）病毒检测与脱毒株系建立：将步骤3）获得的完整植株采用ELISA法进行病毒检测，检测合格后，将合格植株接入诱导培养基以建立脱毒金果榄雌株株系；5）金果榄雌株脱毒苗的快速繁殖：病毒检测合格后，将步骤4）中获得的合格脱毒植株控制适宜的温度、湿度、光照进行扩繁；将合格脱毒植株茎尖接种于愈伤组织诱导2号培养基上培养45天获得愈伤组织；将愈伤组织切成0.5X0.5mm小块接种于继代增殖3号培养基培养45天，形成大量原球茎；将原球茎接种于不定芽分化4号培养基培养60天（根据需要可增加不定芽增殖继代次数），可获得大量脱毒金果榄无根苗；将不定芽接种于生根5号培养基培养80天，可获得已生长3‑5条根的完整金果榄脱毒雌株；6）金果榄雌株脱毒苗驯化培养：将上述5）培养的金果榄雌株脱毒瓶苗移入遮阴度75%的大棚练苗，先将组培瓶苗移入大棚缓苗5天，逐步开取瓶盖让组培苗适应大棚环境2天，加入清水用镊子轻轻取出瓶苗，栽植于已配置好的练苗培养基上，按照行距柱距10cmX10cm定植，浇足定根水，常规化培养90天，即得金果榄雌株脱毒驯化苗。