[发明专利]人体液中抗GABABR自身抗体的检测材料、制备方法及应用有效
| 申请号： | 201910738547.4 | 申请日： | 2019-08-12 |
| 公开（公告）号： | CN110606888B | 公开（公告）日： | 2021-08-31 |
| 发明（设计）人： | 闫亚平;黎培;李科 | 申请（专利权）人： | 陕西脉元生物科技有限公司 |
| 主分类号： | C07K14/705 | 分类号： | C07K14/705;C07K1/14;C12N15/867;G01N33/531;G01N33/564 |
| 代理公司： | 西安恒泰知识产权代理事务所 61216 | 代理人： | 李婷;金艳婷 |
| 地址： | 710003 陕西省西安*** | 国省代码： | 陕西;61 |
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| 摘要： | 本发明公开了人体液中抗GABABR自身抗体的检测材料、制备方法及应用，本发明将GABABR抗原包被于NC膜上制成抗GABABR受体检测材料，人血清和脑脊液中的特异性GABABR抗体会与抗原结合，利用碱性磷酸酶底物‑配体反应进行显色，并在显色反应中加入本发明的封闭材料，可用通过肉眼观察直接判断检测样品中是否含有GABABR抗体。该方法具有灵敏度高，操作简便，快速检测等优点，有助于抗GABABR受体脑炎的识别和诊断。 | ||
| 搜索关键词： | 人体 液中抗 gababr 自身抗体 检测 材料 制备 方法 应用 | ||
【主权项】：
1.人体液中抗GABABR自身抗体的检测材料的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：/n步骤1，获取GABABR的CDS序列作为目的基因，将带有酶切位点的目的基因插入17T2A质粒载体中，得到重组质粒载体17T2A-GABABR；/n其中，17T2A质粒载体包括含氨苄青霉素抗性基因AmpR序列、原核复制子pUC Ori序列、病毒复制子SV4 0O ri序列、RSV启动子、慢病毒5’LTR、慢病毒3’LTR、Gag顺式元件、RRE顺式元件、env顺式元件、cPPT顺式元件、eWPRE增强型土拨鼠乙肝病毒转录后调控元件、CMV启动子、MCS多克隆位点以及T2A元件；/n步骤2，将重组质粒载体17T2A-GABABR转染入293T细胞中，得到17T2A-GABABR-293T细胞；/n步骤3，裂解17T2A-GABABR-293T细胞，去除17T2A-GABABR-293T细胞的核蛋白、DNA和胞浆蛋白，再加入复合提取液，4℃静置15～30min后在35～40℃水浴，直至出现分层；/n其中，复合提取液为Triton X100、CHAPS、N-甲基葡糖胺按照体积比为1:1:1的比例混合或洋地黄皂苷、Triton X100、NP40、CHAPS按照体积比1:1～2：1～2：1的比例混合；/n步骤4：取分层后的沉淀，向沉淀中加入混合液混匀后离心，取上清液，在上清液中加入重悬液和BSA混匀，将所得上清液固化在载体膜上，得到人体液中抗GABABR自身抗体的检测材料；/n其中，混合液由重悬液和蔗糖混合而成，蔗糖的体积摩尔浓度为1.9～5mol/L；重悬液由0.6％～1％NaCl、0.05％～0.1％NP40和1xPI混合而成。/n
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