[发明专利]从万年蒿中提取分离倍半萜内酯类化合物的方法

摘要

本发明涉及从万年蒿中提取分离倍半萜内酯类化合物的方法，所述倍半萜内酯类化合物包括：1α‑乙酰基桉叶‑4‑烯6β，11β氢‑12,6内酯；(11S)‑3‑氧络桉烷‑1,4‑(15)‑二烯烃‑12,6α内酯；1‑表去氢异黄酮；11‑表阿霉素；菊花素；1α‑乙酰基加利卡多醇；氰菊酯；1α，4α‑二羟基桉叶‑2‑烯‑5α，6β，11β氢‑12,6‑内酯；牛蒿素；(+)‑去氢催吐萝芙木醇；提取分离方法为：采用硅胶、ODS开放柱和半制备液相色谱等多种色谱方法，对万年蒿的95％乙醇提取物的乙酸乙酯萃取部分进行分离纯化，分离得到上述10个化合物。该提取方法简单，提取效率高，提取的化合物数量多，为倍半萜内酯化合物的药理性研究奠定基础。

主权项

1.从万年蒿中提取分离倍半萜内酯类化合物的方法，其特征在于，所述倍半萜内酯类化合物包括：1α‑乙酰基桉叶‑4‑烯6β，11β氢‑12,6内酯；(11S)‑3‑氧络桉烷‑1,4‑(15)‑二烯烃‑12,6α内酯；1‑表去氢异黄酮；11‑表阿霉素；菊花素；1α‑乙酰基加利卡多醇；氰菊酯；1α，4α‑二羟基桉叶‑2‑烯‑5α，6β，11β氢‑12,6‑内酯；牛蒿素；(+)‑去氢催吐萝芙木醇；提取分离方法包括以下步骤：步骤S1、取干燥万年蒿地上部分，粉碎后依次用6‑8倍量的95％乙醇回流提取2‑4次，每次1‑2h，合并提取液，提取液减压浓缩得浸膏；步骤S2、取浸膏加适量水混悬，依次用石油醚、乙酸乙酯萃取，回收溶剂后分别得到石油醚部分和乙酸乙酯部分；步骤S3、取乙酸乙酯部分进行硅胶柱色谱分离，用石油醚‑乙酸乙酯(1:0→4:1)梯度洗脱，每个梯度所用洗脱溶剂为20L，收集洗脱液，每10L洗脱液为1个部分，分别减压浓缩，得到4个部分，即Fr.1～Fr.4；其中，所述硅胶柱内径为10cm；步骤S4、将步骤S3获得的Fr.3经硅胶柱色谱分离，用石油醚‑丙酮(5:1→1:1)梯度洗脱，每个梯度所用洗脱溶剂为20L，收集洗脱液，每10L洗脱液为1个部分，分别减压浓缩，得4个亚组分，即Fr.3‑1～Fr.3‑4；其中，所述硅胶柱内径为10cm；步骤S5、将步骤S4获得的Fr.3‑1用适量甲醇溶解后经半制备型HPLC分离纯化得1α‑乙酰基桉叶‑4‑烯6β，11β氢‑12,6内酯和(11S)‑3‑氧络桉烷‑1,4‑(15)‑二烯烃‑12,6α内酯，色谱条件为：Eclipse XDB‑C18色谱柱，紫外检测器，检测波长210nm，柱温30℃，流动相40％MeOH/H₂O，流速3ml/min；步骤S6、将步骤S4获得的Fr.3‑2用适量甲醇溶解后经半制备型HPLC分离纯化得1‑表去氢异黄酮和11‑表阿霉素；色谱条件为：Eclipse XDB‑C18色谱柱，紫外检测器，检测波长210nm，柱温30℃，流动相40％MeOH/H₂O，流速3ml/min；步骤S7、将步骤S4获得的Fr.3‑3用适量甲醇溶解后经半制备型HPLC分离纯化得菊花素、1α‑乙酰基加利卡多醇和氰菊酯粗品，色谱条件为：Eclipse XDB‑C18色谱柱，紫外检测器，检测波长210nm，柱温30℃，流动相40％MeOH/H₂O，流速3ml/min；之后分别取菊花素、1α‑乙酰基加利卡多醇和氰菊酯粗品用适量甲醇溶解后进行二次HPLC制备，进一步分离纯化得菊花素、1α‑乙酰基加利卡多醇和氰菊酯，色谱条件为：Eclipse XDB‑C18色谱柱，紫外检测器，检测波长210nm，柱温30℃，流动相30％ACN/H₂O，流速3ml/min；步骤S8、将步骤S4获得的Fr.3‑4用适量甲醇溶解后经半制备型HPLC分离纯化得1α，4α‑二羟基桉叶‑2‑烯‑5α，6β，11β氢‑12,6‑内酯和牛蒿素，色谱条件为：Eclipse XDB‑C18色谱柱，紫外检测器，检测波长210nm，柱温30℃，流动相40％MeOH/H₂O，流速3ml/min；步骤S9、将步骤S3获得的Fr.4用适量甲醇溶解后经ODS柱色谱分离，甲醇：水＝5:5洗脱，所用洗脱溶剂为10L，收集洗脱液，减压浓缩得1个亚组分，即Fr.4‑1；步骤S10、将步骤S9获得的Fr.4‑1用适量甲醇溶解后经半制备型HPLC分离纯化得(+)‑去氢催吐萝芙木醇，色谱条件为：Eclipse XDB‑C18色谱柱，紫外检测器，检测波长210nm，柱温30℃，流动相40％MeOH/H₂O，流速3ml/min。