[发明专利]一种去除百日咳组分菌毛蛋白2/3内毒素的方法有效
| 申请号： | 201910757403.3 | 申请日： | 2019-08-16 |
| 公开（公告）号： | CN110358802B | 公开（公告）日： | 2021-06-18 |
| 发明（设计）人： | 王长永;王梦舒;徐艳艳;梁洪野;闫慧;原秀娟 | 申请（专利权）人： | 长春百克生物科技股份公司 |
| 主分类号： | C12P21/02 | 分类号： | C12P21/02;C07K14/23;C07K1/36;C07K1/30;C07K1/16;C12R1/01 |
| 代理公司： | 北京集佳知识产权代理有限公司 11227 | 代理人： | 刘猛 |
| 地址： | 130000 吉林省*** | 国省代码： | 吉林;22 |
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| 摘要： | 本发明涉及生物制药技术领域，公开了一种去除百日咳组分菌毛蛋白2/3内毒素的方法。本方法将百日咳杆菌发酵培养后，离心收集菌体，菌体用尿素磷酸盐缓冲液抽提；离心收集上清，使用PEG‑8000和硫酸铵分别进行沉淀；沉淀使用磷酸盐缓冲液抽提，然后离心收集上清液，采用Q‑Sepharose层析柱处理，使用含氯化钠的磷酸盐缓冲液洗脱出Fim2/3组分。本发明联合PEG8000沉淀、硫酸铵沉淀和Q‑Sepharose层析柱处理三个操作，通过多重手段去除菌毛蛋白Fim2/3中的内毒素，可以在不带入外源物质的前提下，保持有效成分Fim2/3生物活性和回收率，同时将Fim2/3中的内毒素去除至10EU/mg以下。 | ||
| 搜索关键词： | 一种 去除 百日咳 组分 蛋白 内毒素 方法 | ||
【主权项】：
1.一种去除百日咳组分菌毛蛋白2/3内毒素的方法，其特征在于，包括：步骤1、将百日咳杆菌发酵培养后，离心收集菌体；步骤2、所述菌体用含尿素的磷酸盐缓冲液抽提，离心收集上清液；步骤3、步骤2上清液加入PEG‑8000进行沉淀；沉淀使用磷酸盐缓冲液抽提，然后离心收集上清液，上清液再用硫酸铵进行沉淀；或步骤2上清液加入硫酸铵进行沉淀；沉淀使用磷酸盐缓冲液抽提，然后离心收集上清液，上清液再用PEG‑8000进行沉淀；步骤4、沉淀使用磷酸盐缓冲液抽提，然后离心收集上清液，获得Fim2/3粗提液；步骤5、Fim2/3粗提液采用Q‑Sepharose层析柱处理，使用含氯化钠的磷酸盐缓冲液洗脱出Fim2/3组分。
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