[发明专利]一种从老年人体滑膜关节软骨分离培养细胞的方法有效
| 申请号： | 201910783787.6 | 申请日： | 2019-08-23 |
| 公开（公告）号： | CN110484495B | 公开（公告）日： | 2021-03-09 |
| 发明（设计）人： | 丁磊;熊刘留;周紫晔;崔萌;王全明;邬敏辰 | 申请（专利权）人： | 江南大学 |
| 主分类号： | C12N5/077 | 分类号： | C12N5/077 |
| 代理公司： | 无锡市大为专利商标事务所(普通合伙) 32104 | 代理人： | 殷红梅;张仕婷 |
| 地址： | 214122 江苏*** | 国省代码： | 江苏;32 |
| 权利要求书： | 查看更多 | 说明书： | 查看更多 |
| 摘要： | 本发明涉及一种从老年人体滑膜关节软骨分离培养细胞的方法，属于人体组织工程技术领域。其从老年关节软骨中获取大量且具有代谢活性的细胞，应用于临床自体软骨细胞移植修复软骨组织缺损和软骨退行性病变的分子病理与生物治疗基础研究。本发明所阐述的软骨细胞分离方法，结合机械切割与酶解软骨组织，在高温高压灭菌的组织分解瓶（Spinner flask）和细胞培养箱中，使软骨碎片与可降解软骨细胞外基质蛋白特异蛋白酶充分接触，达到完全溶解基质最大程度释放软骨细胞的目的。本发明相较于现有的人负重滑膜关节软骨细胞分离方法，软骨细胞的产量更高，活软骨细胞的比例更大，污染几率更低。 | ||
| 搜索关键词： | 一种 老年 人体 关节 软骨 分离 培养 细胞 方法 | ||
【主权项】：
1.一种从老年人体滑膜关节软骨分离培养细胞的方法，其特征是步骤如下：/n（1）取样：取软骨标本，全程无菌冷藏；对软骨标本进行切割，得到直径小于0.5cm组织片；/n（2）第一步降解：将步骤（1）所得软骨组织片在无菌飞旋瓶内，使用重量/体积比为0.4%的Pronase E进行细胞外基质蛋白质的第一步降解，反应在细胞培养箱内进行90分钟；反应条件为：37℃，5% CO2，100%湿度；/n（3）第二步降解：将步骤（2）所得降解后软骨组织片采用0.02% collagenase IA进行细胞外基质蛋白质的第二步降解，反应在细胞培养箱内反应16-20小时；反应条件为：37℃，5%CO2，100%湿度；/n（4）后处理：将步骤（3）所得降解液，即软骨细胞悬液，使用细胞筛过滤除去未消化组织或细胞团，随后室温800-1000 rpm低速离心8-10分钟后，得到软骨细胞；进行细胞计数及活细胞比率计算；/n（5）接种：将步骤（4）分离出得软骨细胞接种于DMEM/F12细胞培养液进行原代培养，接种密度为2 – 4*105 cells/cm2。/n
下载完整专利技术内容需要扣除积分，VIP会员可以免费下载。
该专利技术资料仅供研究查看技术是否侵权等信息，商用须获得专利权人授权。该专利全部权利属于江南大学，未经江南大学许可，擅自商用是侵权行为。如果您想购买此专利、获得商业授权和技术合作，请联系【客服】
本文链接：http://www.vipzhuanli.com/patent/201910783787.6/，转载请声明来源钻瓜专利网。
