[发明专利]一种快速建立H9c2心肌细胞脂肪化模型的方法无效
| 申请号： | 201910788734.3 | 申请日： | 2019-08-26 |
| 公开（公告）号： | CN110499281A | 公开（公告）日： | 2019-11-26 |
| 发明（设计）人： | 李广平;张帆 | 申请（专利权）人： | 首都医科大学附属北京世纪坛医院 |
| 主分类号： | C12N5/077 | 分类号： | C12N5/077 |
| 代理公司： | 暂无信息 | 代理人： | 暂无信息 |
| 地址： | 100038 北*** | 国省代码： | 北京;11 |
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| 摘要： | 本发明提出了一种快速建立H9c2心肌细胞脂肪化模型的方法，步骤如下：将复苏冻存的H9c2细胞采用DMEM高糖完全培养基，连续培养至3代；心肌细胞胰酶消化，DMEM高糖完全培养基终止消化，收集细胞悬液，离心，弃上层，加入DMEM高糖完全培养基，重新得到细胞悬液；细胞计数；细胞种板；配制脂性培养基，并将其加入到细胞种板中，培养24～48小时后，得到H9c2心肌细胞脂肪化模型。本发明的有益效果如下：操作容易，成脂效果好，成本较低，成模速度快，能够为今后深入研究动脉粥样硬化所引发的心血管疾病提供理论参考。 | ||
| 搜索关键词： | 完全培养基 心肌细胞 高糖 细胞悬液 脂肪化 细胞 种板 动脉粥样硬化 心血管疾病 快速建立 连续培养 胰酶消化 培养基 成模 冻存 脂性 配制 上层 复苏 消化 参考 研究 | ||
【主权项】：
1.一种快速建立H9c2心肌细胞脂肪化模型的方法，其特征在于，其方法步骤如下：/n(1)细胞获取：将复苏冻存的H9c2细胞作为P0代心肌细胞，采用DMEM高糖完全培养基，于37℃、5％CO2环境中连续培养至3代后，得到P3代心肌细胞；/n(2)细胞消化：将上述P3代心肌细胞采用0.5～1ml的胰酶消化1～2分钟，之后加入5～8ml的DMEM高糖完全培养基终止消化，然后收集细胞悬液至15ml的离心管，将所述离心管置于离心机中，于1000～1200rpm下离心5～8分钟，弃去上层清液后，加入1～2ml的DMEM高糖完全培养基，重新得到细胞悬液；/n(3)细胞计数：将步骤(2)最终得到的细胞悬液进行充分吹打混匀，取10μl细胞悬液与10μl台盼蓝染色液进行混合，加入细胞计数板进行细胞计数；/n(4)细胞种板：将步骤(2)最终得到的细胞悬液按照细胞计数结果分别接种于六孔板内，每孔细胞数为1*105～5*105个/ml，然后加入2ml的DMEM高糖完全培养基，混匀，于37℃、5％CO2环境中培养24小时后，弃去上层培养液，得到种板；/n(5)诱导细胞脂肪化：配制脂性培养基，并将其加入到步骤(4)中得到的种板中，培养24～48小时后，得到脂肪化的H9c2心肌细胞。/n
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