[发明专利]一种基于特异性靶标鉴定单增李斯特菌血清型的多重PCR方法有效
申请号: | 201910804288.0 | 申请日: | 2019-08-28 |
公开(公告)号: | CN110423833B | 公开(公告)日: | 2023-06-20 |
发明(设计)人: | 陈萍;叶燕锐;林章凛;才艺 | 申请(专利权)人: | 华南理工大学 |
主分类号: | C12Q1/689 | 分类号: | C12Q1/689;C12Q1/686;C12Q1/04 |
代理公司: | 广州粤高专利商标代理有限公司 44102 | 代理人: | 何淑珍;江裕强 |
地址: | 510640 广*** | 国省代码: | 广东;44 |
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摘要: | 本发明公开了一种基于特异性靶标鉴定单增李斯特菌血清型的多重PCR方法。该方法包括:将待测单增李斯特菌菌株进行增菌培养,得到增菌培养液;提取增菌培养液的DNA,将DNA提取液、PCR引物与PCR反应物混合均匀,进行PCR反应,得到PCR反应产物;将PCR反应产物电泳,根据电泳结果判断待检测菌的血清型。本发明针对新挖掘到的单增李斯特菌血清型的特异性靶标lmo2644、LMOf2365_0118、lmo1119、lmo0733基因设计特异性引物,并建立单增李斯特菌血清型的PCR鉴定方法。这些靶标具有准确度高和特异性好的特点。该方法具有准确度高、特异性好、鉴定速度快、成本低廉及操作简单的特点。 | ||
搜索关键词: | 一种 基于 特异性 靶标 鉴定 李斯特 血清 多重 pcr 方法 | ||
【主权项】:
1.一种基于特异性靶标鉴定单增李斯特菌血清型的多重PCR方法,其特征在于,包括如下步骤:(1)将待测单增李斯特菌菌株接种至培养基中进行增菌培养,得到增菌培养液;(2)使用试剂盒法提取步骤(1)所述增菌培养液的基因组DNA,得到待鉴定的DNA提取液;(3)将步骤(2)所述待鉴定的DNA提取液、所述鉴定单增李斯特菌血清型的PCR引物与PCR反应物混合均匀,得到PCR反应体系,然后进行PCR反应,得到PCR反应产物;(4)将步骤(3)所述PCR反应产物进行琼脂糖凝胶电泳,得到电泳结果图,如果所述电泳结果图上出现669bp和500bp条带,则判定步骤(1)所述待测单增李斯特菌菌株的血清群为IIa,其血清型为1/2a或3a;若只出现500bp的条带,则判定为血清群IIb,即血清型1/2b、3b或7;若只出现669bp、243bp和500bp的条带,则判定为血清群IIc,即血清型1/2c或3c;若只出现889bp和500bp的条带,则判定为血清群IVb,即血清型4b、4d或4e;若只出现669bp、889bp和500bp的条带,则判定为血清群L,即血清型4a或4c;如果所述电泳结果图上没有出现以上条带,则步骤(1)所述待鉴定的样品中不含有单增李斯特菌,判断为单增李斯特菌阴性。
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