[发明专利]一种神经球免疫荧光染色的方法

摘要

本发明公开了一种神经球免疫荧光染色的方法：(1)神经球清洗：取悬浮培养的神经球，离心，弃上清，重悬神经球，再次离心，弃上清；(2)固定；(3)通透及封闭；(4)一抗孵育；(5)漂洗；(6)二抗孵育；(7)漂洗；(8)封片：加入PBS缓冲液，重悬，滴加于载玻片上，滴加抗荧光淬灭剂，加盖盖玻片，将神经球压平封片，用于荧光显微镜观察。本发明利用神经球直径大、肉眼可见的特性，直接采用低速离心将细胞收集管底，避免神经球在染色过程中丢失，能够保持神经球原有细胞形态及内部结构，有效避免细胞爬片过程中造成的的抗原特性改变；采用物理挤压法直接对神经球进行压片，将神经球挤压成薄膜状，无需进行切片，对设备要求低。

主权项

1.一种神经球免疫荧光染色的方法，其特征在于：包括以下步骤：(1)神经球清洗：取悬浮培养的神经球，离心，弃上清，重悬神经球，再次离心，弃上清；(2)固定：加入固定剂，轻柔混匀，室温静置30分钟，每5分钟轻弹管底，使神经球与固定液充分接触，离心，弃上清；(3)神经球通透及封闭：加入通透及封闭液，摇床上孵育30～60分钟，然后离心，弃上清；所述通透及封闭液，是由6％BSA溶液与1％Triton X‑100溶液等体积混合而成；(4)一抗孵育：加入适当稀释的一抗，并轻柔混匀，4℃环境下孵育8～12小时，离心，弃上清；(5)漂洗：加入PBST重悬神经球，摇床清洗，离心，弃上清；重复若干次；(6)二抗孵育：加入适当稀释的二抗，轻柔混匀，摇床孵育3小时，离心，弃上清；(7)漂洗：加入PBST重悬神经球，摇床清洗，离心，弃上清；重复若干次；(8)封片：加入PBS缓冲液，轻弹使神经球重悬，将重悬的神经球滴加于洁净的载玻片上，置于超净台中避光风干；于神经球处滴加一滴含DAPI的抗荧光淬灭剂，再加盖一张盖玻片，轻轻将神经球压平封片，用于荧光显微镜观察。