[发明专利]一种叶酸代谢相关基因多态性的检测方法在审
| 申请号： | 201910831826.5 | 申请日： | 2019-09-04 |
| 公开（公告）号： | CN110387409A | 公开（公告）日： | 2019-10-29 |
| 发明（设计）人： | 赵方圆;智慧芳;任静静;倪君君 | 申请（专利权）人： | 北京和合医学诊断技术股份有限公司 |
| 主分类号： | C12Q1/6858 | 分类号： | C12Q1/6858 |
| 代理公司： | 济南信达专利事务所有限公司 37100 | 代理人： | 程佩玉 |
| 地址： | 101111 北京市北京经济技术开发区经*** | 国省代码： | 北京;11 |
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| 摘要： | 本发明提供了一种叶酸代谢相关基因多态性的检测方法，包括：提取受试者的基因组DNA；配置单碱基延伸反应体系以及包含基因组DNA的聚合酶链式反应PCR扩增体系；对PCR扩增体系进行扩增反应，再进行消化处理，然后混合消化处理后的体系和单碱基延伸反应体系，并进行延伸反应，最后进行纯化处理；利用液相色谱‑质谱联用仪检测纯化处理后的产物，确定基因组DNA特定SNP位点的基因型；其中，液相色谱‑质谱联用仪的洗脱流动相为含0.5％～5％(v/v)六氟异丙醇和0.03％～0.5％(v/v)三乙胺的蒸馏水，以及含0.5％～5％(v/v)六氟异丙醇和0.03％～0.5％(v/v)三乙胺的甲醇，洗脱方式为梯度洗脱，液相色谱‑质谱联用仪中的质谱仪为TripleTOF系列质谱仪。本方案能够灵敏、简便的对目标基因的SNP位点进行基因分型。 | ||
| 搜索关键词： | 基因组DNA 液相色谱 单碱基延伸反应 六氟异丙醇 质谱联用仪 纯化处理 相关基因 消化处理 叶酸代谢 多态性 三乙胺 质谱仪 检测 蒸馏水 聚合酶链式反应 洗脱流动相 基因分型 扩增反应 目标基因 梯度洗脱 洗脱方式 延伸反应 质谱联用 基因型 甲醇 灵敏 配置 | ||
【主权项】：
1.一种叶酸代谢相关基因多态性的检测方法，其特征在于，包括：提取受试者的基因组DNA；配置包含SEQ ID NO.1～SEQ ID NO.3所示的单碱基延伸引物序列的单碱基延伸反应体系，并配置包含SEQ ID NO.4～SEQ ID NO.9所示的特异性扩增引物序列和所述基因组DNA的聚合酶链式反应PCR扩增体系；顺次对所述PCR扩增体系进行扩增反应；顺次对扩增反应后的体系进行消化处理；顺次混合消化处理后的体系和所述单碱基延伸反应体系，获得混合液，并对所述混合液进行延伸反应；顺次对延伸反应后的体系进行纯化处理；利用液相色谱‑质谱联用仪检测纯化处理后的产物，确定所述基因组DNA特定SNP位点的基因型；其中，所述液相色谱‑质谱联用仪的洗脱流动相为含0.5％～5％(v/v)六氟异丙醇和0.03％～0.5％(v/v)三乙胺的蒸馏水，以及含0.5％～5％(v/v)六氟异丙醇和0.03％～0.5％(v/v)三乙胺的甲醇，洗脱方式为梯度洗脱，所述液相色谱‑质谱联用仪中的质谱仪为TripleTOF系列质谱仪。
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