[发明专利]高效扩增脐带血NK细胞的无血清培养方法在审
| 申请号： | 201910845554.4 | 申请日： | 2019-09-06 |
| 公开（公告）号： | CN110607276A | 公开（公告）日： | 2019-12-24 |
| 发明（设计）人： | 阳莉;王太林 | 申请（专利权）人： | 阳莉 |
| 主分类号： | C12N5/0783 | 分类号： | C12N5/0783 |
| 代理公司： | 43203 长沙科明知识产权代理事务所(普通合伙) | 代理人： | 陈靖 |
| 地址： | 510000 广东*** | 国省代码： | 广东;44 |
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| 摘要： | 本发明涉及一种高效扩增脐带血NK细胞的无血清培养方法，包括以下步骤：1)制作第一培养基和第二培养基；2)抗体包被；3)MNCs分离及自体血浆制备；4)NK细胞诱导培养；5)NK细胞扩大培养；6)NK细胞收集。本发明NK细胞扩增倍数高、纯度高、成本低、操作步骤简便，同样适用于外周血；本发明提供的分离培养方法解决了脐带血淋巴细胞难获得的问题，培养初始阶段排除了红细胞的污染，后期收获的NK细胞纯度均可达到70％以上，弥补了肿瘤病人NK细胞培养纯度低及数量不足的缺点，在同种异体NK细胞回输方面具有巨大的优势；本发明添加物和培养基配方单一，不易混淆和差错，培养流程简单，技术人员可以很容易的实施。 | ||
| 搜索关键词： | 培养基 扩增 脐带血淋巴细胞 红细胞 添加物 培养基配方 无血清培养 分离培养 抗体包被 扩大培养 同种异体 诱导培养 自体血浆 脐带血 外周血 回输 制备 差错 混淆 肿瘤 收获 污染 制作 | ||
【主权项】：
1.一种高效扩增脐带血NK细胞的无血清培养方法，其特征在于，包括以下步骤：/n1)制作第一培养基和第二培养基；/n在基础培养基中添加终浓度为500～1550IU/ml的细胞因子A得到第一培养基；/n在第一培养基中添加终浓度为40～80ng/ml的细胞因子B和终浓度为5％～10％的添加/n物得到第二培养基；/n2)抗体包被：用生理盐水稀释Herceptin至1mg/ml～2mg/ml，并加入T-75cm
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