[发明专利]制备BEM用于纯化固定化带有AcmA重组蛋白的方法在审
| 申请号： | 201910854616.8 | 申请日： | 2019-09-10 |
| 公开（公告）号： | CN110628746A | 公开（公告）日： | 2019-12-31 |
| 发明（设计）人： | 韩烨;赵芳坤;肖华志;周志江 | 申请（专利权）人： | 天津大学 |
| 主分类号： | C12N9/26 | 分类号： | C12N9/26;C12N1/20;C12R1/07;C12R1/42;C12R1/445;C12R1/265;C12R1/19 |
| 代理公司： | 12201 天津市北洋有限责任专利代理事务所 | 代理人： | 琪琛 |
| 地址： | 300350 天津市津南区海*** | 国省代码： | 天津;12 |
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| 摘要： | 本发明公开了一种利用GEM去除重组蛋白内毒素的方法，它涉及一种去除大肠杆菌表达重组蛋白中内毒素的方法，蛋白‑AcmA融合蛋白重组表达载体，诱导表达后利用GEM(革兰氏阳性基质)进行纯化固定化，然后利用Triton X‑114处理固定化蛋白以去除内毒素。该方法可以在低温(4℃)下进行内毒素的去除工作，避免温度改变影响蛋白活性，并简化去除内毒素操作。 | ||
| 搜索关键词： | 内毒素 去除 重组蛋白 大肠杆菌表达 重组表达载体 革兰氏阳性 固定化蛋白 融合蛋白 影响蛋白 诱导表达 固定化 基质 蛋白 | ||
【主权项】：
1.制备BEM用于纯化固定化带有AcmA重组蛋白的方法，其特征在于，包括如下步骤：/n1)制备带有AcmA标签的重组α-淀粉酶，作为纯化固定化酶的来源；/n2)培养革兰氏阳性细菌、革兰氏阴性细菌；/n3)收集菌体，利用0.1M-0.2M的HCl或TCA煮沸菌体30-60分钟；/n4)离心收集沉淀，利用50mM的Tri-HCl(pH7.2)充分洗涤沉淀，得到BEM；/n5)将BEM调整至相同浓度，用于纯化固定化带有AcmA标签的重组α-淀粉酶；/n6)测定不同BEM纯化固定化的酶活，并进行SDS-PAGE；/n7)利用8M尿素溶解包涵体，利用制备的BEM从包涵体的尿素变性中回收酶活；/n8)测定不同BEM纯化固定化包涵体中的酶活，并进行SDS-PAGE。/n
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