[发明专利]一种粪便中血吸虫DNA提取方法及其快速鉴定LF-RPA方法

摘要

本发明公开了一种粪便中血吸虫DNA提取方法及其快速鉴定LF‑RPA方法。本发明的方法通过提取寄生虫虫卵DNA进行诊断，检测结果可以被未经任何训练的非专业人员肉眼所识别，有利于基层单位或边远区落后地方的推广使用，建立起来的诊断方法具有良好的敏感性，特异性，且能够区分日本血吸虫、曼氏血吸虫和东毕血吸虫，对于低强度感染的诊断具备优势，对于防治血吸虫等吸虫的感染具有重大的意义。

主权项

1.一种粪便中血吸虫DNA提取方法，所述方法为：/n（1）取感染血吸虫的动物粪便置于小烧杯中，加入RO水，玻璃棒搅拌均匀；/n（2）用100目和180目铜筛网过滤，反复冲洗后收集180目铜筛网上的粪便于量杯中，注满生理盐水，室温下静置，弃上清，取沉淀涂片计数虫卵；/n（3）将沉淀转移至小研钵中，倒入少量液氮冷冻，待液氮挥发完以后，进行研磨，反复倒入液氮冷冻研磨，如此反复三次；将研磨后显微镜下观察有无完整虫卵，如有继续研磨；/n（4）将研磨后粉末仔细刮入1.5mlEP管中，加蛋白酶K，混匀将研磨后粉末仔细刮入1.5mlEP管中，加蛋白酶K，混匀；/n（5）加入缓冲液GB，充分颠倒混匀，70℃放置；/n（6）加入无水乙醇，充分震荡颠倒混匀，此时会出现絮状沉淀，瞬离取出管盖内壁水珠；/n（7）将上述液体和絮状物转移至吸附柱中，吸附柱放入收集管中，离心，倒掉废液，将吸附柱放入收集管中；/n（8）向吸附柱加入漂洗液PW，离心，倒掉废液，将吸附柱放入收集管中，重复此步骤两次；/n（9）将吸附柱放入收集管中，离心，倒掉废液，将吸附柱置于室温放置，彻底晾干吸附材料中残余的漂洗液；/n（10）将吸附柱转移至一个新的1.5mlEP管中，向吸附膜中央悬空滴加洗脱液TE，室温放置，离心，吸附柱弃掉，盖上EP管，做好标记，放入-20℃冰箱保存。/n