[发明专利]基于双重链置换和三向DNA结构检测妥布霉素的比色方法有效

专利信息
申请号: 201910892202.4 申请日: 2019-09-20
公开(公告)号: CN110592187B 公开(公告)日: 2022-06-24
发明(设计)人: 周楠迪;欧莹;田亚平 申请(专利权)人: 江南大学
主分类号: C12Q1/682 分类号: C12Q1/682
代理公司: 无锡市大为专利商标事务所(普通合伙) 32104 代理人: 时旭丹;张仕婷
地址: 214122 江苏省无锡市滨湖区蠡湖大道1*** 国省代码: 江苏;32
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摘要: 基于双重链置换和三向DNA结构检测妥布霉素的比色方法,属于食品安全、医药分析及环境污染检测领域。本发明首先设计了双链T1/T2;当存在妥布霉素时,Bsm DNA聚合酶通过强链置换反应合成完全互补的双链,Nt.BstNBI切刻内切酶切割双链上的识别位点;三向DNA结构捕捉报告探针,再生并置换出大量含有G‑四链体形成序列的S1链。此后,G‑四链体/血红素催化ABTS2‑/H2O2显色反应,利用吸光值与妥布霉素浓度间的线性关系可测定妥布霉素含量。本发明通过适配体捕获妥布霉素触发Nt.BstNBI切刻内切酶和Bsm DNA聚合酶介导的双重链置换反应产生大量的报告探针,同时,报告探针触发λ核酸外切酶辅助的环路扩增,实现了比色信号的多重放大,拓宽了检测范围,提高了检测灵敏度。
搜索关键词: 基于 双重 置换 dna 结构 检测 霉素 比色 方法
【主权项】:
1.基于双重链置换和三向DNA结构检测妥布霉素的比色方法,其特征在于:首先将序列T1和T2以相同的浓度混合,高温变性并退火形成双链,在妥布霉素存在的情况下,双链序列中T1的适配体部分识别妥布霉素并与之结合,使T2的3’端暴露出来,然后加入引物1、引物2、Nt.BstNBI切刻内切酶、Bsm DNA聚合酶和游离的脱氧核糖核苷三磷酸到反应体系中,BsmDNA聚合酶通过强链置换反应合成完全互补的双链,Nt.BstNBI切刻内切酶切割双链上的识别位点产生大量的报告探针;/n其次将三条单链DNA S1、S2和S3经高温变性和退火形成的三向DNA结构与报告探针杂交,触发λ核酸外切酶辅助的环路扩增,使得报告探针再生并置换出大量含有G-四链体形成序列的S1链;/n在加入血红素后,G-四链体/血红素催化ABTS
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