[发明专利]一种诱导汗腺功能性修复的方法在审
| 申请号： | 201910895337.6 | 申请日： | 2019-09-20 |
| 公开（公告）号： | CN110684802A | 公开（公告）日： | 2020-01-14 |
| 发明（设计）人： | 孙晓艳;陈润开;付小兵;黄瑾 | 申请（专利权）人： | 中国人民解放军总医院 |
| 主分类号： | C12N15/867 | 分类号： | C12N15/867;C12N15/90;C12N15/12;C12N5/10 |
| 代理公司： | 11319 北京润泽恒知识产权代理有限公司 | 代理人： | 莎日娜 |
| 地址： | 100853*** | 国省代码： | 北京;11 |
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| 摘要： | 本发明提供了一种诱导汗腺功能性修复的方法，包括：设计EDA启动子序列，构建pGLV‑H1‑GFP‑EDA sgRNA质粒；获取pHAGE‑TRE‑dCas9‑VP64质粒；利用慢病毒分别对上述两种质粒进行包装；利用上述两种慢病毒包装的质粒依次转染获取的基底层表皮角质细胞，获得稳定过表达EDA基因的细胞株；利用含强力霉素的培养基培养细胞株为汗腺样细胞；在基质胶环境下，利用含强力霉素的培养基培养汗腺样细胞形成类汗腺原基；将类汗腺原基移植至汗腺丧失区，利用强力霉素诱导形成再生汗腺。本发明应用CRISPR/dCas9技术在基因水平上对基底层表皮角质细胞进行编辑修饰，提高了汗腺重编程的效率；同时以基质胶为支架联合汗腺特异性培养基，诱导表皮角质细胞形成类汗腺原基，促进了体内汗腺从组织结构到生理功能的修复。 | ||
| 搜索关键词： | 汗腺 表皮角质细胞 强力霉素 原基 质粒 诱导 基底层 基质胶 慢病毒 培养基培养细胞 特异性培养基 功能性修复 培养基培养 启动子序列 基因水平 生理功能 细胞形成 组织结构 细胞株 重编程 构建 支架 转染 修饰 种质 体内 细胞 修复 移植 再生 基因 应用 联合 | ||
【主权项】：
1.一种诱导汗腺功能性修复的方法，其特征在于，包括以下步骤：/n设计EDA启动子序列，构建pGLV-H1-GFP-EDA sgRNA质粒；/n获取pHAGE TRE dCas9-VP64质粒；/n利用慢病毒分别对pGLV-H1-GFP-EDA sgRNA质粒和pHAGE TRE dCas9-VP64质粒进行包装；/n获取基底层表皮角质细胞；/n利用慢病毒包装的pGLV-H1-GFP-EDA sgRNA质粒及慢病毒包装的pHAGE-TRE-dCas9-VP64质粒依次转染所述表皮角质细胞，并进行EDA基因鉴定，获得稳定过表达EDA基因的细胞株；/n利用具有强力霉素的汗腺培养基培养所述细胞株，诱导其体外重编程为汗腺样细胞；/n在基质胶环境下，利用具有强力霉素的汗腺培养基培养所述汗腺样细胞，诱导形成类汗腺原基；/n将所述类汗腺原基移植至汗腺丧失区，并利用强力霉素诱导形成再生汗腺。/n
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