[发明专利]一种检测超低频基因突变的高通量测序文库的制备方法在审
| 申请号： | 201910902708.9 | 申请日： | 2019-09-23 |
| 公开（公告）号： | CN110592183A | 公开（公告）日： | 2019-12-20 |
| 发明（设计）人： | 蔡勇平 | 申请（专利权）人： | 山东健福生物科技有限公司 |
| 主分类号： | C12Q1/6806 | 分类号： | C12Q1/6806;C40B50/06;C12Q1/6869 |
| 代理公司： | 11622 北京汇众通达知识产权代理事务所(普通合伙) | 代理人： | 李志男 |
| 地址： | 257000 山东省*** | 国省代码： | 山东;37 |
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| 摘要： | 本发明涉及一种检测超低频基因突变的高通量测序文库的制备方法，其主要特征为将目标细胞的RNA反转录为互补DNA，然后以合成或其它方式取得的RNA同义DNA，与互补DNA杂交，如果存在突变，那么突变区就不能完全杂交。由于DNA内切酶只能切割完全杂交的双链DNA而不能切除不完全杂交的双链DNA，所以我们可以用特定的内切酶切除完全杂交的DNA片断而保存不能完全杂交的DNA片断。然后将带有突变位点的不能完全杂交的而保留的DNA片断扩增，构建高通量测序库进行高通量测序。然后根据测序数据分析出突变位点。 | ||
| 搜索关键词： | 杂交 高通量测序 突变位点 互补DNA 双链DNA 内切酶 切除 测序数据 测序文库 基因突变 目标细胞 超低频 反转录 高通量 突变区 种检测 构建 扩增 制备 突变 切割 合成 保存 保留 分析 | ||
【主权项】：
1.一种检测超低频基因突变的高通量测序文库的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：/nA、以目标样品构建RNA或外显子组的反义链单链DNA文库；/nB、以参照样品构建RNA或外显子组的编码链单链DNA文库；/nC、将反义链单链DNA文库与编码链单链DNA文库进行杂交；/nD、补齐杂交区与识别区的单链区域，以使限制性内切酶在识别区外下游切除完全杂交的杂交体，保留不能完全杂交或不能杂交的差异片断；/nE、以不能完全杂交或不能杂交的差异片断为模板进行PCR扩增，纯化扩增产物，获得双链DNA高通量测序文库。/n
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