[发明专利]从噬菌体抗体库中筛选和验证抗狂犬病病毒中和抗体的方法及筛选试剂盒有效
| 申请号： | 201910916834.X | 申请日： | 2019-09-26 |
| 公开（公告）号： | CN110655571B | 公开（公告）日： | 2021-07-02 |
| 发明（设计）人： | 毛晓燕;陈继军;安晨;赵晓瑞;叶星 | 申请（专利权）人： | 兰州生物制品研究所有限责任公司 |
| 主分类号： | C07K16/10 | 分类号： | C07K16/10;C07K16/00 |
| 代理公司： | 上海申浩律师事务所 31280 | 代理人： | 李阳 |
| 地址： | 730046 *** | 国省代码： | 甘肃;62 |
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| 摘要： | 本发明涉及生物医药工程技术领域，公开了一种从噬菌体抗体库中筛选和验证抗狂犬病病毒中和抗体的方法，包括A、单克隆噬菌体抗体培养，并取培养上清液；B、定性分析：将步骤A中的培养上清液置于96孔板中，依次经DMEM培养基以及中和用病毒中和、BSR细胞悬液培养、预冷丙酮固定后，与稀释后的FITC标记的抗狂犬病病毒核蛋白抗体共孵育，选择可明显抑制病毒感染的克隆测序，排除重复的序列，初步获得中和活性各不相同的抗狂犬病病毒抗体序列；C、定量分析：挑选不同序列有中和活性的各个克隆，重新制备噬菌体抗体颗粒，纯化并稀释一定倍数后采用RFFIT法测定体外中和活性；以及D、全分子抗体瞬时表达和活性分析。 | ||
| 搜索关键词： | 噬菌体 抗体 筛选 验证 狂犬病 病毒 中和 方法 试剂盒 | ||
【主权项】：
1.一种从噬菌体抗体库中筛选和验证抗狂犬病病毒中和抗体的方法，其特征在于，包括如下步骤：/nA、单克隆噬菌体抗体培养，并取培养上清液；/nB、定性分析：RFFIT法初步筛选有中和活性的抗体/n将步骤A中的培养上清液置于96孔板中，依次经DMEM培养基以及中和用病毒中和、BSR细胞悬液培养、预冷丙酮固定后，与稀释后的FITC标记的抗狂犬病病毒核蛋白抗体共孵育，选择可明显抑制病毒感染的克隆测序，排除重复的序列，初步获得中和活性各不相同的抗狂犬病病毒抗体序列；/nC、定量分析：单克隆噬菌体抗体颗粒活性测定/n挑选不同序列有中和活性的各个克隆，重新制备噬菌体抗体颗粒，纯化并稀释一定倍数后采用RFFIT法测定体外中和活性；/nD、全分子抗体瞬时表达和活性分析/n选择噬菌体抗体颗粒活性大于0.5IU/ml的克隆，扩增抗体可变区基因，构建真核瞬时表达质粒，瞬转HEK 293EBNA1细胞，培养上清经Mabselect SuRe亲和纯化后测定抗狂犬病病毒抗体比活，得到抗狂犬病病毒中和抗体。/n
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