[发明专利]一种单分子标签免疫组库高通量测序文库构建方法在审
| 申请号： | 201910972360.0 | 申请日： | 2019-10-13 |
| 公开（公告）号： | CN110734958A | 公开（公告）日： | 2020-01-31 |
| 发明（设计）人： | 鞠巍;徐根明;潘艺;赵谦 | 申请（专利权）人： | 湖南大地同年生物科技有限公司 |
| 主分类号： | C12Q1/6806 | 分类号： | C12Q1/6806;C12Q1/6869;C40B50/06 |
| 代理公司： | 43237 长沙睿翔专利代理事务所(普通合伙) | 代理人： | 周松华;孙建霞 |
| 地址： | 410205 湖南省长沙市长沙*** | 国省代码： | 湖南;43 |
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| 摘要： | 本发明属于医学检测领域，具体涉及一种单分子标签免疫组库高通量测序文库构建方法。本发明利用类似5’RACE的SMART技术和特异性引物，可特异性捕获并无偏好扩增人源RNA中所有低丰度TCRα、TCRβ、BCR重链H、BCR轻链L、BCR轻链K的整个CDR区域(可以单独捕获扩增其中一项，也可以同时捕获扩增所有项目)，并采取一种简单高效的方式对其进行高通量测序文库的构建，从而进行TCR和BCR免疫组库分析。 | ||
| 搜索关键词： | 扩增 捕获 测序文库 免疫组库 高通量 构建 轻链 特异性引物 医学检测 单分子 低丰度 偏好 人源 重链 标签 分析 | ||
【主权项】：
1.一种单分子标签免疫组库高通量测序文库构建方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤：/n(1)提取样本总RNA；/n(2)以步骤(1)得到的总RNA为模板，先后加入RT1引物、单分子标签进行逆转录和模板转换反应，得到带单分子标签的cDNA；/n(3)以一链合成物为模板，加入TS-index引物和RT2引物，进行半巢式扩增，特异性扩增目标区域，并添加测序接头，得到带单分子标签的DNA；/n(4)将特异性扩增产物分选纯化后，加入P7接头引物、P5接头引物，进行PCR扩增，得到测序文库。/n
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