[发明专利]一种中华绒螯蟹双顺反子病毒的RT-PCR检测方法在审
| 申请号： | 201911048843.8 | 申请日： | 2019-10-31 |
| 公开（公告）号： | CN110592288A | 公开（公告）日： | 2019-12-20 |
| 发明（设计）人： | 周阳;鲍胜华;谢国兴;陈正锦;贡成良;冯永杰;薛仁宇;曹广力;胡小龙 | 申请（专利权）人： | 盐城市大丰区水产技术推广站 |
| 主分类号： | C12Q1/70 | 分类号： | C12Q1/70;C12Q1/686 |
| 代理公司： | 32218 南京天华专利代理有限责任公司 | 代理人： | 闫世巍 |
| 地址： | 224100 江苏省盐城*** | 国省代码： | 江苏;32 |
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| 摘要： | 本发明公开了一种中华绒螯蟹双顺反子病毒的RT‑PCR检测方法，按以下步骤进行：（1）取50‑100mg待检组织，提取组织总RNA；（2）待检样品的反转录管用19μL无RNase的双蒸水溶解，加1μL提取的总RNA，42度保温60分钟，75度保温10分钟；（3）待检样品PCR管加24μL双蒸水溶解后，加1μL合成的cDNA，混匀；（4）阳性对照PCR管中，加25μL双蒸水溶解；（5）将步聚（3）、（4）的PCR管进行PCR扩增，扩增条件为：93‑95度预变性3分钟后，按94度变性30秒、50‑57度退火30秒、72度延伸20‑25秒，共扩增25‑35个循环，最后72度延伸10分钟。 | ||
| 搜索关键词： | 双蒸水 溶解 待检样品 总RNA 保温 阳性对照PCR管 退火 双顺反子病毒 中华绒螯蟹 扩增条件 反转录 预变性 延伸 变性 混匀 扩增 合成 | ||
【主权项】：
1.一种中华绒螯蟹双顺反子病毒的RT-PCR检测方法，其特征在于：按以下步骤进行：/n（1）取50-100mg待检组织，提取组织总RNA；/n（2）待检样品的反转录管用19μL无RNase的双蒸水溶解，加1μL 提取的总RNA，42度保温60分钟，75度保温10分钟；/n（3）待检样品PCR管加24μL双蒸水溶解后，加1μL合成的cDNA，混匀；/n（4）阳性对照PCR管中，加25μL双蒸水溶解；/n（5）将步聚（3）、（4）的PCR管进行PCR扩增，扩增条件为：93-95度预变性3分钟后，按94度变性30秒、50-57度退火30秒、72度延伸20-25秒，共扩增25-35个循环，最后72度延伸10分钟；/n（6）PCR反应结束后，取8-10μL反应产物用琼脂糖凝胶电泳进行分离，尔后在紫外观察仪下观察，如果待检样品和阳性对照均可观察到0.29kb的特异性条带，则可判别为待检样品中含有中华绒螯蟹双顺反子病毒，如果待检样品中没有观察到0.29kb的特异性条带，而阳性对照中可观察到0.29kb的特异性条带，则可判别为待检样品中无中华绒螯蟹双顺反子病毒。/n
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