[发明专利]一种慢病毒载体介导SV40 T抗原转染获得永生化细胞株的方法在审
| 申请号： | 201911068048.5 | 申请日： | 2019-11-04 |
| 公开（公告）号： | CN110684738A | 公开（公告）日： | 2020-01-14 |
| 发明（设计）人： | 郭津生;王满 | 申请（专利权）人： | 郭津生 |
| 主分类号： | C12N5/10 | 分类号： | C12N5/10;C12N15/867;C12N15/37;C12R1/91 |
| 代理公司： | 41182 焦作加贝专利代理事务所(普通合伙) | 代理人： | 冯新志 |
| 地址： | 200032 上海市徐汇区枫林路1*** | 国省代码： | 上海;31 |
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| 摘要： | 本发明公开了一种慢病毒载体介导SV40 T抗原转染获得永生化细胞株的方法，属于细胞生物学领域。具体地，本发明通过构建一种能够高效、快速转染的SV40 T抗原慢病毒表达载体，该载体通过工程细胞包装可获得表达SV40 T抗原的慢病毒颗粒用于转染原代分离细胞，进而通过博来霉素（zeocin）抗性特点筛选获得永生化细胞株。本发明公开的构建永生化细胞株的方法具有高效、方便、快捷的特点，并且价格低廉，适于推广应用。 | ||
| 搜索关键词： | 永生化细胞株 转染 构建 慢病毒表达载体 细胞生物学领域 慢病毒颗粒 慢病毒载体 工程细胞 原代分离 介导 抗性 筛选 细胞 | ||
【主权项】：
1.一种构建永生化细胞株的方法，其特征在于，包括以下步骤：/n1)构建SV-40T抗原慢病毒表达载体：/n以含SV40 T抗原cDNA序列的SV40 tsA58质粒为模板，根据NCBI的SV40完整基因组(NC_001669.1)设计特定的质粒构建引物，高保真PCR获取SV40T抗原全长cDNA，对扩增得到PCR产物进行纯化；/n将PCR产物TOPO克隆进入pENTR
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