[发明专利]一种基于非天然氨基酸修饰酶的多点固定化方法

摘要

本发明涉及一种基于非天然氨基酸修饰酶的多点固定化方法，使用非天然氨基酸对叠氮基‑L‑苯丙氨酸对醛酮还原酶进行修饰，同时使用环辛炔改性的氨基活化环氧树脂聚合物对酶进行固定化，而且将其作为固体化载体实现与非天然氨基酸修饰的醛酮还原酶进行多点共价连接，通过炔烃‑叠氮化物环加成反应，完成了酶的一步纯化和固定化。通过本发明方法制得的非天然氨基酸修饰的固定化醛酮还原酶在酶活上比游离酶有了很大的提高，并通过无铜点击反应，使醛酮还原酶省去传统繁琐的纯化方法，其中五点固定化可以实现60％的纯化效率。该方法安全可靠且环境污染少，很大程度节约了纯化所耗的时间和成本，适合于工业化生产。

主权项

1.一种基于非天然氨基酸修饰酶的多点固定化方法，其特征在于包括下述步骤：/n(1)非天然氨基酸修饰醛酮还原酶的合成和表达：使用非天然氨基酸对叠氮基-L-苯丙氨酸对醛酮还原酶进行修饰，得到不同数量突变位点的醛酮还原酶；/n(2)载体活化：将环氧树脂通过一次氨基修饰和二次环辛炔基修饰使其成为带有环辛炔官能基团的环氧树脂载体；/n(3)酶的一步纯化和多点固定化：使用环辛炔官能基团的环氧树脂对不同数量突变位点的醛酮还原酶进行固定化，通过炔烃-叠氮化物环加成反应，完成了酶的一步纯化和固定化。/n