[发明专利]骨髓间充质干细胞膜片的制备方法及其应用在审
| 申请号： | 201911080070.1 | 申请日： | 2019-11-07 |
| 公开（公告）号： | CN110669727A | 公开（公告）日： | 2020-01-10 |
| 发明（设计）人： | 包凤鸣 | 申请（专利权）人： | 深圳科康干细胞技术有限公司 |
| 主分类号： | C12N5/0775 | 分类号： | C12N5/0775;A61K35/28;A61P9/10 |
| 代理公司： | 44411 深圳市鼎智专利代理事务所(普通合伙) | 代理人： | 李滔 |
| 地址： | 518000 广东省深圳市前海深港合作区前*** | 国省代码： | 广东;44 |
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| 摘要： | 本发明公开了骨髓间充质干细胞膜片的制备方法及其在治疗心肌缺血再灌注损伤上的应用。利用密度梯度离心、细胞贴壁和细胞冻存的方法提取扩增细胞，可以获得足够量的未分化的较为单一的MSCs，增殖能力较强，纯度高，可以作为组织工程的种子细胞，为组织工程血管的构建提供依据。而且较Reyes方法去除了免疫磁珠选择的步骤，在实际应用中减少了昂贵的费用，操作中减少了污染的机会。 | ||
| 搜索关键词： | 心肌缺血再灌注损伤 密度梯度离心 组织工程血管 骨髓间充质 方法提取 免疫磁珠 细胞冻存 细胞膜片 细胞贴壁 增殖能力 种子细胞 组织工程 未分化 构建 扩增 制备 应用 细胞 治疗 污染 | ||
【主权项】：
1.骨髓间充质干细胞膜片的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：/nS1：用20ml注射器吸取10ml骨髓液，将细胞悬液贴壁缓慢注入到预置有等体积密度为1.077kg/L的人淋巴细胞分离液的试管内，使两者间形成清晰的界面；/nS2：以2500r/min离心20min，吸取中间的乳白色云雾状单核细胞层，PBS漂洗，1500r/min离心10min，弃上清，加入含15％FBSDMEM-LG培养液10ml，制成单细胞悬液；/nS3：以3×105/cm2密度接种于50ml培养皿内，置入37℃、5％CO2饱和湿度条件下培养，4d后首次半量换液，将未贴壁的细胞全部弃掉，以后每2～3d全量换液一次；/nS4：待细胞汇合成单层后，以0.25％胰蛋白酶(含0.02％EDTA)消化，即得到原代MSCs悬液，再以1×10
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