[发明专利]一种同时检测多种细菌性病原微生物的方法在审
| 申请号： | 201911085521.0 | 申请日： | 2019-11-08 |
| 公开（公告）号： | CN110656191A | 公开（公告）日： | 2020-01-07 |
| 发明（设计）人： | 马永华;芦艳;李仙春;李梅;滕玉箫;张志刚;孙嘉;雷觐雯 | 申请（专利权）人： | 甘肃农业大学 |
| 主分类号： | C12Q1/689 | 分类号： | C12Q1/689;C12Q1/6834;C12Q1/14;C12Q1/10;C12Q1/04 |
| 代理公司： | 11350 北京科亿知识产权代理事务所(普通合伙) | 代理人： | 汤东凤 |
| 地址： | 730070 *** | 国省代码： | 甘肃;62 |
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| 摘要： | 本发明公开了一种同时检测多种细菌性病原微生物的方法，该方法包括以下步骤：将多种细菌性病原微生物的核糖体16S RNA进行序列比对；根据比对确定的保守序列设计通用引物，对下游通用引物5'端用生物素标记，通过PCR扩增获得带有生物素标记的DNA片段；根据比对确定特异片段并分别设计特异性探针以及通用探针，将修饰氨基团的探针通过化学反应共价结合在带负电的尼龙膜；将DNA片段与固定在尼龙膜上的探针杂交，用链霉菌抗生物素蛋白—过氧化物酶和免疫印迹发光氨试剂孵育后，在暗室曝光将结果显影在胶片上，获得菌株检测结果。本发明方法可以快速、高效、大通量的检测人、畜细菌性感染的情况，极大的节约检测成本和检测时间。 | ||
| 搜索关键词： | 检测 生物素标记 细菌性病原 尼龙膜 比对 微生物 负电 抗生物素蛋白 设计通用引物 下游通用引物 化学反应 发光氨试剂 过氧化物酶 特异性探针 细菌性感染 保守序列 共价结合 菌株检测 免疫印迹 探针杂交 特异片段 通用探针 序列比对 氨基团 核糖体 链霉菌 暗室 孵育 探针 显影 修饰 胶片 曝光 节约 | ||
【主权项】：
1.一种同时检测多种细菌性病原微生物的方法，其特征在于，该方法包括以下步骤：/n(1)将多种细菌性病原微生物的核糖体16S RNA进行序列比对；/n(2)根据比对结果确定多种细菌16S RNA的保守序列并设计通用引物，将下游通用引物5'端用生物素标记得到；通过PCR扩增获得带有生物素标记的多种菌株DNA混合片段；/n(3)根据比对寻找每种细菌特有的基因片段并分别设计特异性探针以及与各特异性探针配合的通用探针，将探针5'端连接氨基团，将修饰氨基团的探针通过化学反应共价结合在带负电的尼龙膜；/n(4)将带有生物素标记的多种菌株DNA混合片段与固定在尼龙膜上的探针杂交，用链霉菌抗生物素蛋白—过氧化物酶和免疫印迹发光氨试剂孵育后，在暗室曝光将结果显影在胶片上，获得菌株检测结果。/n
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