[发明专利]产羊毛甾醇大肠杆菌菌株的构建方法在审
申请号: | 201911282159.6 | 申请日: | 2019-12-13 |
公开(公告)号: | CN110923183A | 公开(公告)日: | 2020-03-27 |
发明(设计)人: | 宛雯 | 申请(专利权)人: | 江苏师范大学 |
主分类号: | C12N1/21 | 分类号: | C12N1/21;C12N15/53;C12N15/54;C12N15/61;C12N15/70;C12R1/19 |
代理公司: | 暂无信息 | 代理人: | 暂无信息 |
地址: | 221000 江*** | 国省代码: | 江苏;32 |
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摘要: | 产羊毛甾醇大肠杆菌菌株的构建方法,包括:根据大肠杆菌密码子优化荚膜甲氧球菌的鲨烯环氧酶的密码子,PCR扩增获得鲨烯环氧酶基因片段;PCR扩增获得NADPH‑细胞色素P450还原酶、鲨烯合成酶和羊毛甾醇合成酶基因片段并将其融合成为DNA片段SE‑CPR‑LS,将所述SE‑CPR‑LS片段通过酶切连接的方法克隆到载体pet21c上,构建表达载体pet21c‑SE‑CPR‑LS;将所述鲨烯合成酶基因片段通过同源重组的方法克隆到载体pACYCduet‑1上,构建表达载体pACYCduet‑SS;将所述载体pet21c‑SE‑CPR‑LS和pACYCduet‑SS转化进入大肠杆菌感受态细胞,得产羊毛甾醇大肠杆菌菌株。本发明通过外源质粒导入方法改造大肠杆菌BL21(DE3)系统,使其能够合成羊毛甾醇,并通过密码子优化技术提高了外源基因在大肠杆菌系统中的表达量。 | ||
搜索关键词: | 羊毛 大肠杆菌 菌株 构建 方法 | ||
【主权项】:
暂无信息
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