[发明专利]一种制备非洲猪瘟病毒P30、P54酵母疫苗的方法

摘要

本发明公开了一种制备非洲猪瘟病毒P30、P54酵母疫苗的方法。所述疫苗含有非洲猪瘟病毒强免疫原蛋白P30、膜结构蛋白P54、猪IgG1和IgA1的Fc片段即Fcγ、Fcα以及His纯化标签。本发明包括以下步骤：步骤一、将ASFV病毒免疫原蛋白基因p30、p54与Fcγ、Fcα串联；步骤二、分别构建p30‑Fcγ、p54‑Fcα在酵母内融合表达的转录单位；步骤三、经体外酶连、酵母体内转化及同源重组技术，实现2个转录单位串联，并稳定整合入表面展示型酿酒酵母；步骤四、经过基因组水平和蛋白质水平验证，确认获得2种单独表面展示表达P30‑Fcγ、P54‑Fcα融合蛋白的重组酵母菌株，以及1中同时表面展示表达以上两个融合蛋白的串联复合表达型重组酵母菌株。本发明菌株生产技术成熟，适合大规模生产，使用安全，可以诱导靶动物显著的黏膜及体液免疫反应。