[发明专利]一种提高脯氨酰内肽酶催化效率的分子改造设计方法有效
| 申请号： | 202010300809.1 | 申请日： | 2020-04-16 |
| 公开（公告）号： | CN111540404B | 公开（公告）日： | 2022-04-22 |
| 发明（设计）人： | 李晓琳;韩艳芳;张鲁嘉;张增辉;丛亚龙;马明哲;方波欢 | 申请（专利权）人： | 华东师范大学 |
| 主分类号： | G16B5/00 | 分类号： | G16B5/00;G16B15/30;G16B30/10;G16B50/30 |
| 代理公司： | 上海湾谷知识产权代理事务所(普通合伙) 31289 | 代理人： | 倪继祖 |
| 地址： | 200062 上*** | 国省代码： | 上海;31 |
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| 摘要： | 本发明改造脯氨酰内肽酶以提升其催化效率的理性设计方法主要是通过同源建模获得嗜热球杆菌(Sphaerobacter thermophiles)脯氨酰内肽酶，分子对接获得酶‑底物复合物结构，MD模拟使结构稳定，对底物附近的酶残基进行虚拟饱和突变，约束性MD模拟使酶处于完美催化的“近进攻态”构象，利用MM/GBSA方法计算结合自由能从而虚拟筛选出潜在催化效率提升的突变体酶。通过大肠杆菌表达系统进行酶的表达，镍柱纯化，使用HPLC测定重组酶对于九肽底物的酶活及动力学参数。结果表明，本发明分子改造设计方法可以快速有效提升脯氨酰内肽酶的催化活性，说明本发明的酶改造方法可靠。 | ||
| 搜索关键词： | 一种 提高 脯氨酰内 肽酶 催化 效率 分子 改造 设计 方法 | ||
【主权项】：
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