[发明专利]黄花蒿细胞生物转化二氢去氧青蒿素B的方法和用途

摘要

本发明是黄花蒿细胞生物转化二氢去氧青蒿素B的方法和用途。涉及到黄花蒿脱分化细胞的诱导、悬浮培养，利用TLC、HPLC‑ELSD和GC‑MS法考察并优化二氢去氧青蒿素B最佳转化时间和最佳转化浓度。光照培养条件下，最佳转化条件为60h和90mg/L；暗培养条件下，最佳转化条件为72h和90mg/L。进一步积累转化产物，利用硅胶柱、Sephadex LH‑20及半制备液相进行分离纯化后得到三个化合物，通过HR‑ESI‑MS、NMR进行结构鉴定，确定为3α‑hydroxy dihydro‑epi‑deoxyarteannuin B，9β‑hydroxy dihydro‑epi‑deoxyarteannuin B和14‑hydroxy dihydro‑epi‑deoxyarteannuin B；细胞冻干、乙酸乙酯超声提取以及GC‑MS检测青蒿素的含量，光照培养和暗培养条件下，实验组的青蒿素含量分别增加了3.6％和23.9％。利用qRT‑PCR法检测最佳转化条件下黄花蒿细胞中HMGR、FPS、ADS、CYP71AV1、CPR、DBR2和ALDH1的表达水平。