[发明专利]靶向敲除FRZB基因的双sgRNA和敲除FRZB基因的猪成纤维细胞系及其应用有效
| 申请号： | 202010746768.9 | 申请日： | 2020-07-29 |
| 公开（公告）号： | CN111944811B | 公开（公告）日： | 2022-02-11 |
| 发明（设计）人： | 张博;付玉;张盼;商鹏;张然;张浩 | 申请（专利权）人： | 中国农业大学 |
| 主分类号： | C12N15/113 | 分类号： | C12N15/113;C12N15/90;C12N15/85;C12N5/10;C12N15/11;C12Q1/6888;C12Q1/02;A01K67/027;C12R1/91 |
| 代理公司： | 北京路浩知识产权代理有限公司 11002 | 代理人： | 钱云 |
| 地址： | 100193 *** | 国省代码： | 北京;11 |
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| 摘要： | 本发明涉及基因工程技术领域，尤其涉及靶向敲除FRZB基因的双sgRNA和敲除FRZB基因的猪成纤维细胞系及其应用。本发明提供了靶向敲除FRZB基因的双sgRNA，针对FRZB基因第一外显子上两个位点进行切割，后将所述sgRNA构建至表达载体后通过优化的电转体系转染猪成纤维细胞，再利用流式细胞仪分选出高纯度的阳性单克隆细胞，经基因组鉴定筛选得到FRZB敲除的细胞系。本发明解决了构建敲除细胞系过程中转染效率、打靶效率低、单克隆纯度低的难题，操作简便且得到了较长片段删除的编辑细胞系。涉及到的细胞系可作为体细胞核移植的供体，用于转基因猪的制备，为深度挖掘FRZB基因生物学功能提供了较好的研究工具。 | ||
| 搜索关键词： | 靶向 frzb 基因 sgrna 纤维 细胞系 及其 应用 | ||
【主权项】：
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