[发明专利]一种体外制备环状DNA的方法在审
| 申请号： | 202010938129.2 | 申请日： | 2020-09-09 |
| 公开（公告）号： | CN114231524A | 公开（公告）日： | 2022-03-25 |
| 发明（设计）人： | 高杨;刘超;高峰;顾颖;沈玥 | 申请（专利权）人： | 深圳华大生命科学研究院 |
| 主分类号： | C12N15/10 | 分类号： | C12N15/10;C12P19/34 |
| 代理公司： | 南京理工大学专利中心 32203 | 代理人： | 刘海霞 |
| 地址： | 518083 广东*** | 国省代码： | 广东;44 |
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| 摘要： | 本发明公开了一种体外制备环状DNA的方法。所述方法先根据目的线性DNA片段，设计Gibson组装连接片段，同时引入限制性内切酶Bsa Ⅰ的识别位点序列，然后将目的线性DNA片段和Gibson组装连接片段混合，进行Gibson组装，再以Gibson组装产物为模板，进行滚环扩增，纯化得到RCA产物，之后对纯化的RCA产物进行Bsa Ⅰ酶切，酶切后进行琼脂糖凝胶电泳，切胶回收与目的线性DNA片段大小一致的酶切条带，最后将酶切产物利用T4 DNA连接酶进行环化并纯化得到目的线性DNA片段的环化产物。本发明方法能够替代传统质粒，除必需元件外，仅额外引入长度为11个碱基的内切酶识别序列，将环状DNA分子量降到最低的同时降低生物安全风险，实现体外环化线性DNA片段。 | ||
| 搜索关键词： | 一种 体外 制备 环状 dna 方法 | ||
【主权项】：
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