[发明专利]一种稳转表达SpCas9蛋白细胞系构建的方法及应用

摘要

本发明涉及一种稳转表达SpCas9蛋白细胞系的构建方法及其应用，构建方法包括：慢病毒的包装以及纯化，包括HEK 293T细胞准备，转染包装质粒，转染培养后收取细胞培养上清，浓缩病毒液；将得到的浓缩病毒感染细胞，包括药物浓度筛选，慢病毒感染细胞，药物筛选，挑取单克隆进行鉴定。采用稳转表达SpCas9蛋白细胞系的构建方法，获得小鼠成肌细胞C2C12稳转表达SpCas9蛋白细胞系和小鼠胚胎干细胞E14稳转表达SpCas9蛋白细胞系，可稳定表达SpCas9蛋白，可作为快速验证工具，用于对设计的SgRNA进行快速的功能验证来检测SgRNA设计是否成功，同时也可以作为功能基因的筛选体系进行后续的大规模功能基因筛选。