[发明专利]一种新型CRISPR-Cas9系统载体及其应用

摘要

本发明实施例涉及生物技术领域，具体涉及一种新型CRISPR‑Cas9系统载体及其应用。本发明实施例提供的载体上依次包括下述功能元件：上游LoxP序列、sgRNA序列、Cas9蛋白、可诱导启动子、Cre重组酶、同向下游LoxP序列；其中，sgRNA序列和Cas9蛋白顺序可互换；sgRNA序列靶向目的基因。本发明提供的载体，将CRISPR‑Cas9系统与Cre‑Loxp系统结合，充分发挥两套系统的基因敲除功能，将上游LoxP序列设置在CRISPR‑Cas9系统前；在CRISPR‑Cas9系统后依次设置可诱导启动子、Cre重组酶和下游同向LoxP序列；在CRISPR‑Cas9系统完成基因敲除或者基因敲入功能后，对可诱导启动子进行诱导，开始表达Cre重组酶，Cre‑Loxp系统启动，将上游LoxP序列和下游同向LoxP序列之间的功能元件敲除，彻底避免Cre‑Loxp系统和CRISPR‑Cas9系统过度剪切细胞基因组或引起免疫反应。