[发明专利]一种高纯度CRISPR-Cas9蛋白的酶切方法在审
| 申请号： | 202110213884.9 | 申请日： | 2021-02-25 |
| 公开（公告）号： | CN112961874A | 公开（公告）日： | 2021-06-15 |
| 发明（设计）人： | 李森;张伦;孙伟;韦伟洋 | 申请（专利权）人： | 通用生物系统（安徽）有限公司 |
| 主分类号： | C12N15/70 | 分类号： | C12N15/70;C12N15/62;C12N9/22 |
| 代理公司： | 合肥正则元起专利代理事务所(普通合伙) 34160 | 代理人： | 刘生昕 |
| 地址： | 239000 安徽省滁*** | 国省代码： | 安徽;34 |
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| 摘要： | 本发明公开了一种高纯度CRISPR‑Cas9蛋白的酶切方法，第一步、载体构建：合成RGP基因，并克隆至自行改造pGreat‑M载体，完成载体构建；第二步、载体蛋白表达和纯化：使用组合形纯化标签His+MBP+TEV+Cas9进行载体蛋白表达和多步纯化条件优化；第三步、高浓度和纯度纯化方案设计：使用自行优化的培养基培养，MBP柱进行纯化，His‑TEV酶进行酶切，通过Ni柱反筛，分子筛和离子柱多步纯化，并进行HPLC检测；第四步、基因敲除酶切体系条件构建和效率优化：包括SSA活性检测、体外切割活性验证、内源活性检测，本研究保证了高水平和高活性蛋白酶的获得，使得Cas蛋白活性得到高效发挥。 | ||
| 搜索关键词： | 一种 纯度 crispr cas9 蛋白 方法 | ||
【主权项】：
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