[发明专利]一种L-半胱氨酸转运蛋白突变体及其在生产L半胱氨酸中的应用在审
| 申请号： | 202110635463.5 | 申请日： | 2021-06-08 |
| 公开（公告）号： | CN113549633A | 公开（公告）日： | 2021-10-26 |
| 发明（设计）人： | 刘清岱;刘光辉;鞠云 | 申请（专利权）人： | 天津科技大学 |
| 主分类号： | C12N15/31 | 分类号： | C12N15/31;C12N15/10;C12N15/70;C12N15/66;C12P13/12 |
| 代理公司： | 天津盛理知识产权代理有限公司 12209 | 代理人： | 刘丹舟 |
| 地址： | 300222 天津市河*** | 国省代码： | 天津;12 |
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| 摘要： | 本发明涉及一种L‑半胱氨酸转运蛋白突变体制备方法，其方法步骤包括：⑴A31V突变体的获得，以SEQIDNO.2核苷酸序列为模板，SEQIDNO.3、SEQIDNO.4为引物，进行PCR得到的突变体基因eamBA31V；⑵将突变体基因eamBA31V与PMW118质粒分别用EcorI,XbaI双酶切，酶切产物纯化后用T4连接酶22℃连接12小时，连接产物用化学转化法转化DH5α感受态细胞，涂布于含氨苄氯霉素的LB固体平板上，37℃过夜培养；⑶对固体培养基上长出的单菌落用PMW118通用引物M13F、M13R进行菌落PCR，将PCR产物测序，验证正确的单菌落扩大培养，提取质粒PMW118‑eamB‑A31V。本发明同时将L‑半胱氨酸转运蛋白突变体应用于产L‑半胱氨酸大肠杆菌工程菌株，可使大肠杆菌对L‑半胱氨酸耐受性提高1.78倍，L‑半胱氨酸产量提高18％。 | ||
| 搜索关键词： | 一种 半胱氨酸 转运 蛋白 突变体 及其 生产 中的 应用 | ||
【主权项】：
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