[发明专利]一种棒状杆菌质粒复制子的改造方法及其产品有效
| 申请号： | 202110998111.6 | 申请日： | 2021-08-27 |
| 公开（公告）号： | CN113652442B | 公开（公告）日： | 2023-04-07 |
| 发明（设计）人： | 刘秀霞;黄丹妮;余心宇;杨艳坤;白仲虎 | 申请（专利权）人： | 江南大学 |
| 主分类号： | C12N15/77 | 分类号： | C12N15/77 |
| 代理公司： | 南京禹为知识产权代理事务所(特殊普通合伙) 32272 | 代理人： | 王晓东 |
| 地址： | 214122 江苏*** | 国省代码： | 江苏;32 |
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| 摘要： | 本发明基于pEC‑XK99E中的pGA1棒杆菌复制子这一在谷氨酸棒杆菌中拷贝数约为30的低拷贝质粒复制子，将复制蛋白Rep的325位异亮氨酸突变为苏氨酸、398位编码丝氨酸的氨基酸变为同义密码子，成功获得了一种可以提高棒杆菌质粒拷贝数的复制子pGA1‑Rep‑I325T/S398。将该复制子用于高拷贝质粒的构建，携带有pGA1‑Rep‑I325T/S398复制子的质粒pEC‑XK99E‑Rep‑T/S在谷氨酸棒杆菌中复制后，通过质粒体外抽提证实增加了菌体中质粒的数量。构建pEC‑XK99E‑EGFP‑Rep‑T/S质粒，通过测定不同菌体量下的荧光值，与为突变质粒相比荧光量增加三倍即改造后的质粒提高了蛋白的表达量。同时通过荧光定量PCR手段，测定突变后拷贝数为野生型复制子的质粒的8倍约为245。 | ||
| 搜索关键词： | 一种 杆菌 质粒 复制子 改造 方法 及其 产品 | ||
【主权项】：
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