[发明专利]一种SNV的外延探针式qPCR检测方法

摘要

本发明公开了一种针对单碱基变异(SNV)的外延探针式qPCR检测方法，根据已知单碱基变异位点设计4条引物，其中两条为外侧引物，两条为特异引物，特异引物3′端碱基分别与突变模板和正常模板碱基互补，3′端附近碱基可引入或不引入错配，其5′端外延一段人工序列，人工序列的5′段设计一条同向附属引物，3′段设计一条附属探针，在特异引物与下游引物扩增中，特异引物上的附属探针在附属引物延伸中被降解和发光以指示特异引物的扩增效率。如仅测单碱基变异位点的一种基因型，可使用两条外侧引物、一条特异引物及特异引物的附属引物及探针。本方法尚有多个实现模式，本方法较探针式AS‑PCR有更高的灵敏度和更低的成本。