[发明专利]真核细胞S-腺苷甲硫氨酸浓度感知荧光报告系统有效
| 申请号： | 202111427318.4 | 申请日： | 2021-11-26 |
| 公开（公告）号： | CN114149976B | 公开（公告）日： | 2023-08-11 |
| 发明（设计）人： | 杨鹏;王译萱;高倩倩 | 申请（专利权）人： | 同济大学 |
| 主分类号： | C12N5/10 | 分类号： | C12N5/10;C12N15/867;C12N15/65;C12N15/31;C12N15/10;C12Q1/02;G01N21/64 |
| 代理公司： | 北京纪凯知识产权代理有限公司 11245 | 代理人： | 陆惠中 |
| 地址： | 200092 *** | 国省代码： | 上海;31 |
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| 摘要： | 本发明属于生化检测领域，涉及一种真核细胞S‑腺苷甲硫氨酸浓度感知荧光报告系统，填补了活细胞内SAM浓度灵敏检测的技术空白，同时实现了调控SAM代谢的功能基因筛选。首先公开了一种基于大肠杆菌蛋氨酸代谢途径中MetJ阻遏蛋白和met‑box序列的结合偏好性，利用AAVS1定点插入构建的真核细胞的SAM感知系统。主要包括：S1：从MetJ蛋白结合的候选序列中确定可实时反映SAM浓度的met‑box序列,并筛选优选序列；S2：利用AAVS1定点插入荧光报告序列，获得等位基因双荧光报告系统；S3：将MetJ蛋白和Cas9蛋白构入报告系统，获得可感知SAM浓度的双荧光报告系统。本发明提供了一种真核细胞SAM浓度实时感知荧光报告系统，利用此系统可检测活细胞内SAM浓度并筛选调控SAM代谢的相关基因。 | ||
| 搜索关键词： | 真核细胞 腺苷 甲硫氨酸 浓度 感知 荧光 报告 系统 | ||
【主权项】：
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