[发明专利]一种中华鳖和中华草龟胚胎成纤维细胞永生化方法在审
| 申请号： | 202210173319.9 | 申请日： | 2022-02-24 |
| 公开（公告）号： | CN114657142A | 公开（公告）日： | 2022-06-24 |
| 发明（设计）人： | 孙云霄;曹代男;魏玉峰;高养春;秦瑶 | 申请（专利权）人： | 广东省科学院动物研究所 |
| 主分类号： | C12N5/10 | 分类号： | C12N5/10;C12N15/867;C12N15/34;C12N5/073 |
| 代理公司： | 广州科粤专利商标代理有限公司 44001 | 代理人： | 刘明星;朱聪聪 |
| 地址： | 510000 *** | 国省代码： | 广东;44 |
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| 摘要： | 本发明公开了一种中华鳖和中华草龟胚胎成纤维细胞永生化方法。将包含SV40大T抗原的重组慢病毒感染中华鳖或中华草龟的原代胚胎成纤维细胞后，用嘌呤霉素筛选获得中华鳖或中华草龟永生化胚胎成纤维细胞。本发明利用磷酸钙转染法制备包含SV40大T抗原的重组慢病毒，再用SV40慢病毒感染第3代原代胚胎成纤维细胞后用嘌呤霉素筛选永生化胚胎成纤维细胞，该方法经济简单而且费时较短。本发明成功的建立了中华鳖和中华草龟永生化胚胎成纤维细胞系。培养的ImPSEFs和ImMREFs均为贴壁生长，呈经典的细长纺锤形，能在30–34℃良好生长，最佳血清浓度为10％；可检测到成纤维细胞标记基因VIM和ACTA2的表达，以及SV40基因的表达；可用脂质体介导法进行细胞转染，转染率约为30％。 | ||
| 搜索关键词： | 一种 中华 胚胎 纤维 细胞 永生 方法 | ||
【主权项】：
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