[发明专利]利用shRNA沉默人Tim-3基因构建CAR-T细胞的方法及其应用

摘要

本发明提供了利用shRNA沉默人Tim‑3基因构建靶向ROR1的CAR‑T细胞的方法及其应用，本发明方法制备的HKP55 CAR‑T细胞能应用于癌症的治疗。本发明通过设计3种不同的小发卡RNA（shRNA）序列特异性的靶向Tim‑3基因，通过筛选获得沉默效果最好的shRNA‑3序列。因此，将shRNA‑3序列与靶向ROR1的CAR序列共转导入T细胞，制备出Tim‑3基因沉默的ROR1 CAR‑T（HKP55 CAR‑T）细胞。HKP55 CAR‑T细胞的Tim‑3表达水平极大的降低，与ROR1 CAR‑T（HKP69 CAR‑T）细胞相比较，Tim‑3基因的沉默显著增强了ROR1 CAR‑T细胞对高表达Galectin‑9的靶细胞的体外杀伤以及靶细胞依赖的细胞增殖。因此，HKP55 CAR‑T细胞能够克服复杂的免疫抑制性的肿瘤微环境，持续增殖并发挥抗肿瘤效应功能。