[发明专利]一种副溶血弧菌基因高效敲除质粒的构建方法有效
申请号: | 202210235371.2 | 申请日: | 2022-03-11 |
公开(公告)号: | CN114606254B | 公开(公告)日: | 2023-08-25 |
发明(设计)人: | 王小元;孟祥宇;王建莉;檀昕;周晴;黄丹阳;季帆 | 申请(专利权)人: | 江南大学 |
主分类号: | C12N15/74 | 分类号: | C12N15/74;C12N15/31;C12N1/21;C12R1/63 |
代理公司: | 哈尔滨市阳光惠远知识产权代理有限公司 23211 | 代理人: | 赵巧娜 |
地址: | 214122 江苏省无锡市滨*** | 国省代码: | 江苏;32 |
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摘要: | 本发明公开了一种副溶血弧菌基因高效敲除质粒的构建方法,属于分子生物学和生物技术领域。本发明优化了敲除过程,引入Cre/loxP系统。在敲除同源臂之间加入了带有loxP位点的庆大霉素抗性片段,后该抗性片段通过Cre酶去除。第二次同源重组时加入庆大霉素,只有正确进行同源重组的菌株可以存活于10%蔗糖庆大抗性平板上,以此提高敲除菌株的筛选效率。再进行第二次结合转导,将带有cre基因的pOTC质粒导入副溶血弧菌。cre基因在细胞中表达Cre酶,识别loxP位点,并去除loxL与loxR之间的基因片段,即去除庆大抗性片段,在含有10%蔗糖的试管中去除pOTC质粒,本发明的方法提高正确菌株的筛选效率。 | ||
搜索关键词: | 一种 溶血 弧菌 基因 高效 质粒 构建 方法 | ||
【主权项】:
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