[发明专利]基于基因多拷贝筛选高表达FAD-GDH重组毕赤酵母菌株的方法在审
| 申请号： | 202210604030.8 | 申请日： | 2022-05-31 |
| 公开（公告）号： | CN114891825A | 公开（公告）日： | 2022-08-12 |
| 发明（设计）人： | 董聪;王玥;高庆华;罗同阳;刘攀;王庆庆 | 申请（专利权）人： | 河北省微生物研究所有限公司 |
| 主分类号： | C12N15/81 | 分类号： | C12N15/81;C12N15/67;C12N15/66;C12N15/64;C12N15/53;C12N15/10;C12N9/04 |
| 代理公司： | 北京贵都专利代理事务所(普通合伙) 11649 | 代理人： | 田志华 |
| 地址： | 071052 河北*** | 国省代码： | 河北;13 |
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| 摘要： | 本发明提供了一种筛选高表达FAD‑GDH的重组毕赤酵母菌株的方法，包括如下步骤：通过同尾酶法构建了FAD依赖的葡萄糖脱氢酶FAD‑GDH的2‑4拷贝重组表达载体pPICZαA‑2GDH、pPICZαA‑3GDH和pPICZαA‑4GDH；其中在试管水平，单拷贝平均酶活11.953U/mL，二拷贝平均酶活27.99U/mL，三拷贝平均酶活44.792U/mL，四拷贝平均酶活57.027U/mL；分别比单拷贝提高2.34、3.75、4.78倍；选择单拷贝菌株和四拷贝菌株进行10L罐扩大培养，单拷贝菌株诱导108h酶活达到最高697.125U/mL，四拷贝菌株诱导132h酶活达到最高1063.279U/mL，比单拷贝酶活提高52.52％。本发明表明通过增加目的基因拷贝数策略有助于提高FAD‑GDH的表达量。 | ||
| 搜索关键词： | 基于 基因 拷贝 筛选 表达 fad gdh 重组 酵母 菌株 方法 | ||
【主权项】：
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