[发明专利]一种测定猴血清中贝伐珠单抗的浓度的质谱检测方法

摘要

本发明涉及一种测定猴血清中贝伐珠单抗的浓度的质谱检测方法，包括以下步骤：加样，取猴血清样品20.0μL，置于2.0mL离心管中，加60.0μL 0.1mg/mL十二烷基磺酸钠溶液，涡流2min，加入20.0μL 50.0mM二硫苏糖醇溶液，涡流2min；还原，60℃超声30min；衍生化，冷却后加入10.0mL 250mM碘乙酰胺溶液，避光条件下低速涡流30min；蛋白沉淀，加入冷藏后的甲醇200μL，涡流10min，14000rpm，4℃，离心10min；超声酶解，取上清后丢弃，加入100μL 100mM碳酸氢铵溶液，涡流2min，加入100mL 0.500mg/mL胰蛋白酶溶液，60℃超声60min；富集浓缩，加入50.0μL含1％甲酸的乙腈溶液，涡流2min，加入200μL乙腈，涡流5min，14000rpm，4℃，离心10min，取200μL上清液到96孔板中，氮气吹干，加入100μL初始流动相复溶，涡旋混匀；仪器检测，取5μL进行LC‑MS/MS分析。本发明主要解决原有质谱检测技术灵敏度低、酶解效率低、酶联免疫技术重现性差、成本高等问题。