[发明专利]酶法合成胆红素

摘要

酶法合成胆红素属于以动物血液为材料使用酶法合成胆红素。酶促降解合成胆红素的工艺是将新鲜动物血离心、细胞破碎成血红蛋白浆后加入一定量的重组血红素加氧酶系混合液在37℃的反应柱中酶解5小时，酶解液加入氢氧化钠碱解，离心去除蛋白，上清液用氯仿萃取后蒸发浓缩，洗涤制成胆红素，用本法合成的胆红素生产周期缩短三分之二，成本降低70％，收率高达总血量的千分之一，血红素转化率达65％以上，产品纯度高，胆红素IXa含量高达92％以上，经济效益显著。

主权项

1、一种以新鲜动物血为原料一步合成胆红素的方法--酶法合成胆红素，其特征在于胆红素的酶促降解合成工艺如下：(1)在新鲜动物血中加入8%柠檬酸钠抗凝剂，在温度为5～10℃，速率3000r.p.m条件下离心15′，得到的血红蛋白液以10000r.p.m高速捣碎5′，破碎细胞成血红蛋白浆；(2)在血红蛋白浆中，按新鲜血量的5%加入重组血红素加氧酶系的混合酶液和3倍血红蛋白浆量、PH为7.4的磷酸缓冲液上反应柱，同时在反应柱中加入2%的H2O2和5%葡萄糖液，在37℃温度条件下反应5小时；(3)在经酶解的反应液中加入1N的氢氧化钠溶液，调节PH至11，并煮沸3′；(4)碱解液在5℃温度条件下，以3000r.p.m速率离心15′去除蛋白；(5)在上清液中按1∶1的重量比加入氯仿液，再用2N盐酸调溶液至PH至4.5～5.0，分层，收集氯仿混合液；(6)氯仿混合液经旋转蒸发浓缩后，减压，在50℃温度下回收氯仿得胆红素液；(7)胆红素液用无水乙醇、乙醚洗涤除去杂质得到的胆红素，再在60℃温度中真空干燥为胆红素成品。