[发明专利]哺乳动物细胞系和获得糖蛋白的方法

摘要

本发明涉及哺乳动物细胞系，特别是能以稳定形式表达作为Epstein-Barr病毒抗原的糖蛋白gp250(220)，350和250(220)/350的仓鼠细胞系，还涉及从无蛋白培养基中培养的细胞中获得糖蛋白的方法。

主权项

1.在无蛋白培养基中稳定地表达作为Epstein—Barr病素抗原的糖蛋白(gp)250(220)、糖蛋白(gp)350和/或杂交糖蛋白(gp)250(220)/(gp)350的哺乳动物细胞系，它是通过下述步骤得到的(A)从没有选择标记的仓鼠细胞系开始，该选择标记后来被按照(A)(c)所述方法进行染色体整合的载体表达，或被按照(B)所述方法进行染色体整合的载体表达，(a)在含血清培养基中培养细胞，并使它们附着在底物上或相互附着，(b)重复更换部分被消耗的培养基，同时缓慢降低培养基的血清含量，最后对其进行无血清培养—不主动地消除细胞的附着，—可选地，使细胞球形体形成或分开，分离分开的细胞球形体，在悬浮液中培养同时摇动，选择出在小团粒中生长的或单个生长的细胞(c)最后，使选择出的细胞经过如下处理步骤，(ca)用表达上述糖蛋白(gp)的载体转染细胞系，其中，载体含有一种细胞系所没有的选择标记，(cb)培养细胞系，利用选择标记选择出一旦不再使用选择因予(抑制剂)就能稳定地表达糖蛋白的细胞，或者(B)使哺乳动物细胞系首先经过处理步骤(A)(ca)和(A)(cb)，再经过处理步骤(A)(a)至(A)(b)。