[发明专利]一种制造重组人粒－巨噬细胞集落刺激因子的方法

摘要

本发明涉及一种利用基因工程技术制造重组人粒—巨噬细胞集落刺激因子方法，其目的在于提高粒—巨噬细胞集落刺激因子的表达水平，便于纯化制备。利用ＰＣＲ技术改构其ｃＤＮＡ成熟肽编码区５′端，消除其强二级结构，将其插入高效表达载体，受热诱导后得到高效表达，分离包含体、溶解、复性、纯化后得到比活性〉１×１０7，纯度〉９８％的重组人粒—巨噬细胞集落刺激因子纯品，可以满足临床应用要求。

主权项

1、一种利用基因工程技术制造重组人粒-巨噬细胞集落刺激因子的方法，其特征在于用PCR方法对人粒-巨噬细胞集落刺激因子cDNA的改构，获得的cDNA核苷酸序列为ATGGCACCAGCACGTTCTCCATCTCCGTCTACTCAGCCCTGGGAGCATGTGAATGCCATCCAGGAGGCCCGGCGTCTCCTGAACCTGAGTAGAGACACTGCTGCTGAGATGAATGAAACAGTAGAAGTCATCTCAGAAATGTTTGACCTCCAGGAGCCGACCTGCCTACAGACCCGCCTGGAGCTGTACAAGCAGGGCCTGCGGGGCAGCCTCACCAAGCTCAAGGGCCCCTTGACCATGATGGCCAGCCACTACAAGCAGCACTGCCCTCCAACCCCGGAAACTTCCTGTGCAACCCAGACTATCACCTTTGAAAGTTTCAAAGAGAACCTGAAGGACTTTCTGCTTGTCATCCCCTTTGACTGCTGGGAGCCAGTCCAGGAGTAA或者ATGGCACCGGCTCGTTCTCCATCTCCGTCTACTCAGCCCTGGGAGCATGTGAATGCCATCCAGGAGGCCCGGCGTCTCCTGAACCTGAGTAGAGACACTGCTGCTGAGATGAATGAAACAGTAGAAGTCATCTCAGAAATGTTTGACCTCCAGGAGCCGACCTGCCTACAGACCCGCCTGGAGCTGTACAAGCAGGGCCTGCGGGGCAGCCTCACCAAGCTCAAGGGCCCCTTGACCATGATGGCCAGCCACTACAAGCAGCACTGCCCTCCAACCCCGGAAACTTCCTGTGCAACCCAGACTATCACCTTTGAAAGTTTCAAAGAGAACCTGAAGGACTTTCTGCTTGTCATCCCCTTTGACTGCTGGGAGCCAGTCCAGGAGTAA，获得重组质粒以及对此工程菌进行表达，经离心、洗涤液洗涤、回收包含体、尿素溶解、稀释复性液中复性，经Q-SepharoseFF和SephacrylS-200层析柱纯化，分步收集可得重组人粒-巨噬细胞集落刺激因子纯品。