[发明专利]含有EB病毒壳蛋白gp125基因工程菌株的建立及其应用

摘要

本发明为建立一种含有EB病毒壳蛋白gp125基因工程菌株及将该菌作为诊断抗原在疾病诊断中的应用，其特点是用基因工程的手段构建壳蛋白gp125的基因结构，并且能够分别在原核和真核系统中表达，再经纯化，获得纯的，单一的蛋白，用于诊断，检查人血清中的相对应的抗体。本发明的优点是简便，敏感和特异，由于高效表达，从质和量上解决了诊断抗原的来源，降低了成本，使用安全，无污染。

主权项

1、一种含有EB病毒壳蛋白gp125基因的工程菌株，其特征在于壳蛋白基因的构建及在原核系统中的表达为：(1)EB病毒基因组BamHI酶解的A片全长11000多个碱基对，它被克隆在质粒pBR322中，其克隆过程如下：用内切酶BamHI/EcoRI从A片中获得5200bp一段DNA，含gp125全部基因，利用这段DNA上的两个XhoI酶位点和两点之间的pst-1酶，获得约1000bpXhoI/pst-1区段，含gp125全基因中段的三分之一以上序列；(2)将上述基因插入puc载体，puc系统是大肠杆菌质粒，能在大肠杆菌中独立复制，其中的启动子能使其下游插入的三联密码相匹配的外来DNA编码相应的蛋白，将分离得到的XhoI/pst-1基因插入puc载体启动子下游的HincII/pst-1位点，即用HincII/pst-1酶将环状的puc质粒DNA切成直线状，再用T4DNA连接酶将XhoI/pst-1DNA连接在质粒DNA的切口上，使成重组的环状DNA，将其转染进入经氯化钙处理过的大肠杆菌，在选择培养基上能存活的细菌即含重组的DNA，获得的细菌株低温保存。