[发明专利]生产核酸的拷贝

摘要

公开了一种方法，该方法用固定在固相支持物上的寡核苷酸来扩增核酸。靶核酸链(样品中待分析)同寡核苷酸杂交并且用靶链作为模板来生产靶链拷贝(包含固定的寡核苷酸)。将靶链从靶链拷贝上变性解离并同未延伸的寡核苷酸再杂交。在下一步中，从与靶链杂交的寡核苷酸上合成出新的靶(1)链拷贝，并且用前面生成的靶(1)链拷贝可同时合成出靶(2)链拷贝。按所需的次数不断重复下列步骤变性，再杂交，生成靶(1)和靶(2)链拷贝，就可以得到理想的扩增度。

主权项

1.一种生成至少是部分存在或潜在存在于样品中的核酸链(靶链)拷贝的方法，该方法包括以下步骤：(i)提供一种固相支持系统，其上固定有大量的能同靶链杂交的单链寡核苷酸。(ii)提供了靶链的单链形式并将其同支持物上的寡核苷酸杂交，寡核苷酸的数量要大大超出靶链的数量，(ii)(a)清洗支持系统以除去未杂交的物质，(iii)生成靶1链的拷贝，该拷贝掺入有固定的寡核苷酸及包含同至少是部分靶链互补的核苷酸序列，也就是说生成的靶1链拷贝至少有一部分是以靶链为模板而生成的，并且，如果需要，可完成靶1链拷贝序列形成。(iv)变性同靶1链拷贝杂交的核酸链并且可选择使至少是部分的前述链同支持物上的未转变成靶1链拷贝的寡核苷酸再杂交。(v)同时，(a)用固定于固相支持物上的靶1链拷贝为模板来合成(从杂交于靶1链拷贝的引物上合成)靶2链拷贝，靶2链拷贝含有感兴趣的核酸序列，且(b)若靶链已同固定的寡核苷酸杂交，则可用其作为模板来合成更多的至少是部分的靶1链拷贝，并且(若需要)完成靶1链的形成，并且(vi)按所需次数重复步骤(iv)和(v)，每次重复步骤(iv)和(v)均用靶2链拷贝来生成更多的靶1链拷贝。