[发明专利]大熊猫全基因组DNA提取方法

摘要

本发明提供一种大熊猫全基因组ＤＮＡ提取方法，包括将ＤＮＡ提取材料用不同浓度乙醇逐级脱水，沉淀分离、临界干燥，除去乙醇或福尔马林，粉碎，加入蛋白酶和ＳＤＳ消化，再用苯酚、氯仿提抽，冷乙醇沉淀，真空干燥。该方法解决了大熊猫及其它野生和圈养动物ＤＮＡ的材料来源，可用于动物种群的群体遗传研究，以及医学上疑难病症的检材固定后作基因分析。

主权项

1、一种大熊猫全基因组DNA提取方法，其特征在于包括以下步骤：1)在大熊猫全基因组DNA提取材料中按1∶1的比例加入80％乙醇，室温静置，离心分离，取沉淀；2)在1)所得沉淀中加入90％乙醇，室温静置，离心分离，取沉淀；3)在2)所得沉淀中加入100％乙醇，室温静置，离心分离，取沉淀；4)将3)所得沉淀入滤纸袋内，封口，放入临界点干燥器样品室，由钢瓶加入液态二氧化碳，至液态二氧化碳液面超过纸袋最高点为止；5)样品室加温至31℃，大气压为72.8毫米汞柱后，维持两小时，打开放气阀门，排出气体，取出纸袋；6)将纸袋内样品放入研钵内，加入液氮，研为粉末，按1∶1比例加入TNE缓冲液，移入离心管内，加入蛋白酶K和SDS，于55℃保温消化；7)分别用苯酚提抽，氯仿提抽，95％冷乙醇沉淀，吸出大熊猫全基因组DNA，真空干燥，于4℃下保存备用；其中，大熊猫全基因组DNA提取材料是新鲜粪便、火盆烘烤粪便、福尔马林固定粪便、乙醇固定粪便、尿液、福尔马林固定器官组织、乙醇固定器官组织、石蜡包埋器官组织、陈旧标本皮肤。